Diapositive 1

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Congélation ou RNAlater  lexpérience de la
tumorothèque régionale de Midi-Pyrénées
Peter M1, Péries S2, Selves J2, Voigt
JJ3, Bauvin E1, Valmary-Degano S2
1 Réseau régional de cancérologie de
Midi-Pyrénées Oncomip - 37 allées Jules Guesde -
31000 Toulouse. 2 Laboratoire dAnatomie
pathologique - CHU Purpan - 1 place du Dr
Baylac - 31059 Toulouse cedex 9. 3 Laboratoire de
pathologie - Institut Claudius Regaud - 20-24 rue
du pont Saint- Pierre - 31000 Toulouse.
Contexte et objectifs
Conditionnement des prélèvements dans les
établissements

• Tumorothèque régionale (appel à projet juillet
  2005 INCa/DHOS)
• un réseau pour les établissements de
  Midi-Pyrénées
• Organise la congélation des échantillons tumoraux
  dans les établissements périphériques et leur
  transport vers les tumorothèques existantes
• Permet la réalisation danalyses de biologie
  moléculaire à visée sanitaire pour tous les
  patients de la région

Milieu conservateur RNAlater  Congélation
différée à larrivée à la tumorothèque Facilité
dutilisation Qualité de coupe et contrôle
morphologique difficile ? protocole de rinçage
des tissus au PBS (Ellis et al., 2002)
Azote liquide Congélation immédiate Méthode de
référence Coût élevé Contraintes de fonctionnement
Lobjectif de ce travail est dévaluer la
pertinence de lutilisation du RNAlater dans le
cadre de la tumorothèque régionale
Méthodologie

• Paramètres testés
• temps dimmersion dans le RNAlater T116j,
  T28j, T348h, T472h
• temps de rinçage dans le PBS 5 min, 10 min et
  15 min
• quantité de PBS utilisé A10ml, B1ml, C 30ml

• Variables observées
• qualité du contrôle morphologique
• - qualité des ARN extraits

Echantillons testés (n15) ganglion, colon -
immergés dans le RNAlater - congelés (contrôle
positif T0)
Résultats
Figure 2 Qualité des ARN extraits selon
différents paramètres. Echantillons I à IV. To
congélation. T1 à T4 temps dimmersion dans le
RNAlater (rinçage 10 ml de PBS pdt 5 min). A,B,C
quantité de PBS utilisée pour le rinçage des
échantillons immergés dans le RNAlater pdt 15j.
PM1,2 marqueurs de poids moléculaire

• Contrôle morphologique insatisfaisant dans 13
  cas sur 15 la surface examinée est insuffisante
  par rapport à la surface totale du fragment
  (lt20) (Figure 1)
• Pour les deux cas interprétables, le tissu avait
  été rincé avec 30ml de PBS pendant 10min avant
  congélation
• Bonne qualité des ARN quels que soient les
  paramètres testés (Figure 2)

Discussion et Conclusion
Le RNAlater permet de réaliser les examens de
biologie moléculaire avec une excellente
préservation des ARN mais il ne permet pas de
contrôle morphologique satisfaisant. Ce contrôle
est pourtant indispensable à certains examens de
biologie moléculaire comme la recherche
dinstabilité microsatellitaire dans les cancers
recto-coliques où linterprétation des résultats
tient compte du pourcentage de surface tumorale
de léchantillon utilisé. Labsence de contrôle
morphologique ne permet pas de détecter les faux
négatifs, dont la proportion est évaluée à 15
dans le cancer recto-colique (CO Carrefour
Pathologie Ann Pathol 2007271S132 ).
Le RNAlater nest donc pas préconisé en première
intention et doit être réservé aux établissements
à très faible activité et/ou trop éloignés dun
laboratoire de pathologie. La congélation
immédiate reste la technique de référence