Zytogenetik der Non-Hodgkin-Lymphome des Kindes- und Jugendalters

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Zytogenetikder Non-Hodgkin-Lymphome des Kindes-
und Jugendalters
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Chromosomale Aberrationen bei ALL
pro-B common prä-B B-ALL
T-ALL AUL mixed
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Chromosomale Aberrationenbei B-NHL/B-ALL
t(814)(q24q32)
c-MYC ? IgH, Ig?, Ig?
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Chromosomale Aberrationenbei ALCL
t(25)(p23q35)
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Aberrationen in T-Zell-Lymphomen
14q11 ? TCRa?
Weitere Translokationen t(814)(q24q11) t(1114)(
p15q11)
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Aberrationen in T-Zell-Lymphomen
7q35 ? TCRß
Aberration Partnergen t(17)(p34q35) LCK t(710)
(q35q24) HOX11 t(719)(q35p13) LYL1
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Genetische Diagnostik

• klassische Zytogenetik
• G-, R-, Q-, C-Bandenfärbung
• Molekulare Zytogenetik
• Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH)
• Chromosomen-Painting (WCP)
• Zentromer-Sonden
• YAC and Cosmid-Sonden
• 24-Farben-FISH (SKY/M-FISH)
• Comparative genomic hybridization (CGH)
• CGH auf Chromosomen
• Array CGH
• Molekulargenetik
• Long distance (LD-) PCR
• reverse transcriptase (RT-) PCR
• real time quantitative (RQ-) RT-PCR

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Zytogenetik

• Versand
• Zellgewinnung
• 24 Std.-Kultur
• Zugabe von Colchizin
• Herstellung der Präparate
• Hypotone Phase
• Fixieren in AlkoholEisessig 31
• Auftropfen
• Färbung
• G-Banden-Färbung
• Auswertung
• Computergesteuerte Bildverarbeitung

Voraussetzung genügend vitale Zellen
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Nachweis von 8q24-Aberrationen mit
break-apart-Sonde
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24-Farben-FISH
4345,X,-Y,der(1)t(15)(q10?p10),der(1)t(15)(q1
0?p10),del(6)(q15),der(8)t(813)(p? q?)t(822)(q
24q11),-10,-15,del(16)(q13),der(22)t(822)(q24q1
1),mar,inccp4/4345, idem,-der(22)t(822)(q24q
11),mar,inccp3/46,XY2
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Comparative Genomic Hybridization (CGH)
Nachweis der Aberration durch Fluoreszenz-Markieru
ng normaler Chromosomen
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Polymerase KettenreaktionPolymerase Chain
Reaction (PCR)
94C
72C
60C
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Alternative Methoden zum Nachweis
Lymphom-spezifischer Aberrationen

• Interphase-FISH am Ausstrich/Tupfpräparat oder
  nach Kultur mit break-apart-Sonde
• Nachweis einer MYC- oder ALK-Translokation

• Metaphase-FISH nach Kultur mit break-apart-Sonde
• Nachweis einer MYC- oder ALK-Translokation (und
  des Partner-chromosoms)

• 24-Farben-FISH nach Kultur
• Nachweis der 8q- oder 2p-Translokation und des
  Partner-chromosoms
• zusätzlich weitere Aberrationen (außer inv,
  kleinen del oder ins)

• Comparative genomic hybridization (CGH)
• Nachweis eines Zugewinns oder Verlustes von
  Chromosomen-stücken oder einzelnen Genen

• Polymerase-Kettenreaktion (LD-PCR, RT-PCR)
• Nachweis des MYC- oder ALK-Rearrangements und des
  Fusions-partners

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Probleme bei der zytogenetischen Auswertung von
Lymphomen

• oft normaler Karyotyp oder kein Ergebnis
• mögliche Ursachen
• keine Proben eingesandt
• inadäquate Versandbedingungen
• nicht genügend Lymphomzellen
• Knochenmark ohne Befall
• kein Tumormaterial eingesandt
• eingesandtes Material kein Tumor (V.a. Lymphom)
• Lymphomzellen gehen schnell in Apoptose
• inadäquate Kulturbedingungen (Medium/Zeit)
• kryptische Aberrationen

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Häufigkeit unterschiedlicher Karyotypen bei B-NHL
963 Patienten aus mehreren BFM-NHL Studien 199
vollständige Karyotypen
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Warum Zytogenetik?

• spezifische Aberrationen kann man auch mit
  anderen Methoden nachweisen
• Herstellung von Metaphasepräparaten schwierig
  (Kultur etc.)
• Ergebnis fraglich (z.B. normaler Karyotyp)

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Häufigkeit von Sekundäraberrationen
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Häufigkeit sekundärer Aberrationen bei Burkitt-NHL
sekundäre Aberrationen mit 8q24
Aberrationen ohne 8q24
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Häufigkeit von 2p23-Aberrationen bei ALCL
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Sekundäraberrationen bei NHL im Kindesalter

• prognostische Bedeutung noch unklar
• möglicherweise schlechtere Prognose für einige
  Aberrationen
• Bedeutung für Lymphomentstehung

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Problemlösung

• für ein gutes Ergebnis
• ausreichend Material verschicken
• gutes Material
• möglichst Tumorgewebe
• Gewebe nicht austrocknen lassen
• vitale Zellen
• adäquate Versandbedingungen
• möglichst sofort versenden
• innerhalb von 24 Std. im Labor
• Kurierdienst (Ankunft bis 10.00 Uhr)

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NHL-BFM-Materialversand
KM-Befall und/oder Pleuraerguss und/oder Aszites
nur Tumor
Biopsie
Punktion
Diagnosestellung NHLimmunologisch und
zytomorphologisch
Diagnosestellung NHLhistologisch und
immunhistochemisch

• Tumormaterial formalinfixiert

• Tumormaterial in Medium
• Tumortupfpräparate
• Liquor, KM, Blut, Serum

• flüssiges Material heparinisiert
• Zytospinpräparate bzw. Ausstriche
• Liquor, KM, Blut, Serum

• flüssiges Material heparinisiert
• Zytospinpräparate bzw. Ausstriche

Zytomorphologie / Genetik / Zellbank Onkogenetisc
hes Labor und NHL-BFM-Studienzentrale Gießen
Immunologie Immunologisches Zellmarkerlabor,
Berlin
Histologie / Immunhistochemie LK-Register,
Kiel oder ein anderes referenzpathologisches
Institut der NHL-BFM-Studie