Banche dei Tessuti Umani

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Banche dei Tessuti Umani

• Obiettivi ed aspetti regolatori in Italia ed
  Europa

Luigi G. Spagnoli Cristina Venturini
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Sequenziamento del genoma

• Nuove prospettive per lutilizzo di tessuti
  umani
• Ricerca traslazionale
• Ricerca su eziopatogenesi
• delle malattie
• Individuazione nuovi
• target diagnostici, farmacologici

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(No Transcript)
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- In situ ibridization -
Laser dissection microscopy - Immunohistochemistry
- Tissue arrays - Confocal
microscopy - Autoradiography
(GTP gS)
Molecular imaging
Functional validation
Genomics and proteomics
- Cell biology, tissue pharmacology, tissue
slice - Gene/protein overexpression -
Gene/protein manipulation activation, mutation -
Gene/protein knockout antisense, RNA
interference, ribozyme, dominant negatives
- Positional cloning

mutational analysis - Quantitative PCR
(TaqMan) -Serial analysis of gene
expression -Microarrays -Bioinformatics -Western
blotting -Antibody or protein microarrays
Expert validation
human valitated targets
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Target Validation?
X
90 molecole in fase clinica
farmaci
400 targets farmacologici
Tutti i farmaci
a validated target is one that can be
manipulated with drugs to produce a positive
effect in humans. (Norton P. Peet, Aurigane
Discovery Technologies- Boston. Targets 2003,
2125-127) target validation refers to the
assessment of the causal link between a potential
target and a specific disease, syndrome ( Hans
Winkler, Enabling Science and Technology Target
Validation Astra Zeneca. Targets, 2003 269-71)
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Human Target Validation?
target validation in human tissue should be
considered as a key step in the research process
before embarking on expensive chemistry,
preclinical and clinical development programmes.
( R. Coleman, K. Clark. Pharmagene Laboratories,
Targets 2003, 258-64)
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5HT in Irritable Bowel Syndrome
Limited efficacy Side effects
Inhibitor molecules
Pharma Targets
5HT3 e 5HT4 Receptors
from Exp Animals
Pharmacologic Validation
Human Tissues Target validation
5HT2B Receptor
5HT2B Rec. New validated Target
Development of RS 127445 Potent inhibitor of 5HT2B
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Domanda tessuti umani in aumento
Paraffin embedded tissues
Morphological data
Cryopreserved tissues
Genomic and proteomic data
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Difficoltà reperimento tessuti umani per ricerca
?
necessità di creare una rete nazionale ed
internazionale di banche dei tessuti per ricerca
COMPITI
reperire, trattare, conservare e distribuire
cellule, tessuti e organi umani.
10
(No Transcript)
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Necessità che le attività delle banche dei
tessuti siano regolamentate da normative comuni a
livello europeo/internazionale
Le reti nazionali ed internazionali
Regole comuni e condivise
Linee guida SOP
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Tessuti già regolamentati a livello nazionale e
comunitario

• Organi per trapianti (Legge 91/1999)
• Tessuti e cellule da applicare al corpo umano
  (Direttiva EU/2004 su definizione di norme di
  qualità e di sicurezza per la donazione,
  approviggionamento, controllo, lavorazione,
  conservazione, stoccaggio e distribuzione di
  tessuti e cellule umani)
• Sangue e suoi derivati a scopo trasfusionale
  (Direttiva EU/1989 e Decr.Min. 78/2001)
• Embrioni (Identità e statuto dellembrione,
  1996, Com.naz.Bioetica)
• Spermatozoi e oociti per la procreazione
  assistita (Legge 40/2004)

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Definire lentità da regolamentare Biobanche
genetiche vs banche dei tessuti umani

• Opinione del Comitato etico europeo (1998) sugli
  aspetti etici relativi alle banche dei tessuti
  umani
• anche se ogni tessuto conservato è una
  potenziale fonte di informazioni genetiche (DNA),
  la suddetta opinione non riguarda le banche
  genomiche (banche DNA o biobanche)

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• Sono definite biobanche genetiche le raccolte di
  campioni di tessuti e linee cellulari, da cui si
  ottengono acidi nucleici e proteine, che
  rappresentano unimportante fonte di risorse per
  la diagnosi e la ricerca da quella di base fino
  alla sperimentazione di terapie per le malattie
  genetiche.
• La peculiarità delle biobanche genetiche richiede
  che i campioni conservati siano collegabili ai
  dati anagrafici, genealogici e clinici relativi
  ai soggetti da cui deriva il materiale
  depositato.

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Banche dei tessuti
Eziopatogenesi e Target terapeutici
Studi epidemiologici e di popolazione
Banche DNA
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Origine dei tessuti da conservare nelle banche

• Intervento diagnostico o terapeutico (residui)
• Materiale specificamente donato per un
  progetto di ricerca e conservato per successivo
  uso
• Materiale da donatore, in origine donato per
  trapianto, e/o non utilizzato o ritenuto inadatto
  per trapianto
• Da persone decedute e sottoposte ad autopsia

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Valorizzare il ruolo dellanatomopatologo e
degli archivi dellAnatomia Patologica
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•  Servizi di Anatomia Patologica
• sede di raccolta di tutti i tessuti umani è il
  laboratorio di anatomia patologica, in cui i
  patologi ricevono e processano gran parte dei
  campioni di tessuti e cellule provenienti da
  pazienti
• lanatomopatologo è lunica figura professionale
  abilitata a riconoscere e classificare tessuti
  patologici differenziandoli da quelli normali
• lanatomopatologo è lunica figura professionale
  che può certificare il tipo di lesione e la
  qualità del tessuto

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Applicazione di Tecniche Molecolari (RT-PCR) ai
Tessuti in Paraffina
Fattori prognostici
Farmacoge netica
Fattori predittivi

• M. Bredelet al. Amplification of Whole Tumor
  Genomes and Gene-by-Gene Mapping of Genomic
  Aberrations from limited sources of Fresh-Frozen
  and Paraffin-Embedded DNA.
• J Mol Diagnostics 2005,7 171-182
• M. Jaremko et al. MALDI-TOF MS and TaqMan
  Assisted SNP Genotyping of DNA Isolated from
  Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissues
  (FFPET). Human Mutation 2005 25 232-238.
• S.Paik et al.Technology insightapplication of
  molecular techniques to formalin-fixed
  paraffin-embedded tissues from breast cancer.
  Nature Clinical Pratice Oncology. 2005 2246-254

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Problematiche legate alluso dei tessuti per
ricerca da risolvere in ambito normativo

• Protezione individuo (consenso informato,
  riservatezza dei suoi dati personali e medici,
  sicurezza degli operatori)
• Natura profit/no profit delle banche dei tessuti
  umani
• Cessione a terzi (industria farmaceutica,
  biotech) del materiale biologico

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Consenso informato principio riconosciuto da
tutti, ma la sua traduzione nella pratica
incontra difficoltà. Approcci
diversi

• Opt-in il paziente deve dare un consenso
  esplicito.
• Consenso esplicito per ciascun progetto (Svezia,
  per tessuti non anonimi)
• consenso generico sulluso dei suoi tessuti in
  vaste categorie di ricerca. (requisito
  approvazione dei progetti da parte di un comitato
  indipendente sulla base di standard scientifici
  ed etici).
• Opt-out il consenso si ritiene dato se il
  paziente non si è espresso contro (Olanda, per
  tessuti anonimizzati)

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.Il livello di consenso offerto al donatore
dovrebbe dipendere dal modo in cui il suo tessuto
è etichettato e identificato

• Oosterhuis JW, Coebergh JW and Van Veen E-B.
  Tumour banks well-guarded treasures in the
  interest of patients. Perspectives-Nature Reviews
  Vol.3 (2003)

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Problema della riservatezza dei dati

• La banca di tessuti è costituita da raccolte
  organizzate di campioni biologici e dati
• La possibilità di rintracciare la persona da cui
  hanno origine campione e dati varia a seconda del
  modo in cui i campioni sono collegati
  allidentità del loro donatore nel database
• Gamma delle possibilità di identificazione di un
  donatore di tessuti
• Direttamente identificabile
• Indirettamente identificabile o codificato
• Criptato
• Anonimizzato
• Anonimo

Cambon-Thomsen A The social and ethical issues of
post-genomic human biobanks Perspectives Vol. 5
(2004)
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Uso secondario di tessuti conservati

• Possibile anche se non prevedibile in genere al
  momento della raccolta del campione.
• Occorre un nuovo consenso ?
• Dipende dal sistema vigente, comunque minimo
  comune denominatore di raccomandazioni e
  regolamentazioni in materia è che qualsiasi uso
  non previsto richiede unautorizzazione, con o
  senza nuovo consenso, di un comitato etico di
  ricerca indipendente o un comitato di revisione
  istituzionale

Cambon-Thomsen A The social and ethical issues of
post-genomic human biobanks Perspectives Vol. 5
(2004)
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Commercializzazione materiale biologico

• Tutti gli stati UE aderiscono al principio in
  base al quale le donazioni di tessuti umani
  devono essere gratuite, sullesempio del sangue,
  quindi si escludono pagamenti al donatore
  banca dei tessuti ente no profit per
  principio ma non escluse strutture private
  profit (Opinion of the European Group on ethics
  on the ethical aspects of tissue banking, 1998)

La raccomandazione del Consiglio dEuropa del 94
era invece più categorica (enti non profit -
eccetto in caso di necessità di sanità pubblica e
previa debita autorizzazione)
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Commercializzazione materiale biologico
Tendenza generale
Proteggere il corpo umano e il suo genoma da ogni
forma di sfruttamento economico pur riconoscendo
la possibilità di profitti relativi alla
proprietà intellettuale derivante dallopera di
ingegno sui materiali biologici. Convenzione di
Bioetica di Oviedo (1997) il corpo e le sue
parti, in quanto tali, non devono essere fonte di
profitto (art.21) quando una parte del corpo
umano è stata prelevata, questa non può essere
conservata e utilizzata per scopo diverso da
quello per cui è stata prelevata se non in
conformità alle procedure di informazione e
consenso appropriate (art.22)
La questione della proprietà del materiale
biologico deve essere definita più precisamente e
chiaramente in ambito comunitario.
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• Manca ancora una normativa comunitaria che regoli
  luso di tessuti e cellule umani per fini di
  ricerca

Lazione legislativa nellambito della ricerca
con materiali biologici umani è ancora agli
albori, sia a livello nazionale che
internazionale
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Esempi di alcuni paesi che si sono dotati di
normativa specifica

• Svezia (2003) opt-in consenso specifico
• Francia (2004) opt-out
• Norvegia (2004) opt-in
• Gran Bretagna (2004) Human Tissue Act
• USA

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UK Human Tissue Act, 2004

• Human Tissue Authority
• (funzione consultiva, sovrintende al rispetto
  dellAtto)
• Essa emanerà codici di condotta e provvederà a ad
  autorizzare e ispezionare
• conservazione e uso di corpo umano per esami
  anatomici e relativa ricerca
• esecuzione di esami post-mortem tra cui prelievo
  e detenzione di tessuto umano
• prelievo di tessuto umano dal corpo di una
  persona deceduta per altri fini stabiliti tranne
  il trapianto
• conservazione e uso di corpo umano o sue parti
  per public display
• conservazione di tessuto umano per altri fini
  stabiliti, per esempio banche dei tessuti umani
  per trapianto o ricerca

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USA

• Medical research involving human subjects
  includes research on identifiable human material
  or identifiable data

Common
ricerca su materiali biologici umani
ricerca sull uomo
Rule
IRB esame etico scientifico
Consenso informato
(Knoppers, B M Laberge, C.M. Research and stored
tissues persons as sources,samples as persons ?
J.Am. Med. Assoc. 274, 1806 (1995) Wendler, D.
What research with stored samples teaches us
about research with human subjects. Bioethics 16,
33 (2002)
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Situazione normativa italiana

• Non esistono specifiche norme sulle banche dei
  tessuti umani per ricerca.

Comitato Nazionale per la Biosicurezza e le
Biotecnologie
Linee guida per la Istituzione Certificazione
delle Biobanche
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Brain Banking

• Su campioni chirurgici tumori, epilessia
  (ippocampo),mal.metaboliche.
• Su materiale autoptico m. neurodegenerative
  (Alzheimer, Parkinson), m. infettive ( AIDS ), m.
  di Jacob-Creutzfeld.

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Brain Banking di tessuti autoptici
Regolamento di polizia mortuaria (DPR 285/90,
art. 41, comma 2) Il prelevamento e la
conservazione di cadaveri e di pezzi anatomici,
ivi compresi i prodotti fetali, devono essere di
volta in volta autorizzati dallautorità
sanitaria locale semprechè nulla osti da parte
degli aventi titolo. Art. 413 del C.P
Chiunque disseziona o altrimenti adopera un
cadavere, o una parte di esso, a scopi
scientifici o didattici in casi non consentiti
dalla legge, è punito con la reclusione fino a
sei mesi o con la multa fino a lire un milione
..
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Modifica del regolamento di polizia mortuaria
(D.P.R.10.09.1990 n. 285)

• Art.37- Riscontro diagnostico
• Comma 4 è consentito il prelievo di tessuti
  ovvero di organi, al fine di eseguire
  accertamenti specifici il prelievo verrà
  descritto nel verbale di riscontro diagnostico e
  sarà finalizzato alla precisazioone diagnostica,
  alla ricerca scientifica, allinsegnamento.

Capo 7- Prelievo di parti di cadavere a scopo di
trapianto Terapeutico Art. 45- Banche di tessuti
e parti di cadavere Comma1 nel corso di
riscontro diagnostico o di autopsia, ai sensi
dellart.2 della legge 2.12. 1975 n.644, è
consentito il prelievo di tessuti o parti di
cadavere, finalizzati a trapianto terapeutico,
anche per il conferimento a Banche o centri di
conservazione di tessuti e organi.
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Alcune realtà europee

• Gran Bretagna (UK Biobank)
• Finlandia (GenomEUtwin)
• Islanda (DeCODE)
• Estonia (Estonian Genome Project)
• Banca dei tumori dellEORTC
• Tubafrost

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European Journal of Human Genetics (2003) 11,
475488 www.nature.com/ejhg
An empirical survey on biobanking of human
genetic material and data in six EU
countries Isabelle Hirtzlin1, Christine
Dubreuil2, Nathalie Preaubert3, Jenny Duchier2,
Brigitte Jansen4, Jurgen Simon4, Paula Lobato de
Faria5, Anna Perez-Lezaun6, Bert Visser7, Garrath
D Williams8 and Anne Cambon-Thomsen,2 on behalf
of the EUROGENBANK consortium
A total of 147 institutions concerned with
biobanking of human samples and data were
investigated by questionnaires and interviews.
Most institutions surveyed belong to the public
or private non-profit-making sectors, which have
a key role in biobanking. This activity is
increasing in all countries because few samples
are discarded and genetic research is
proliferating. Collections vary in size, many
being small and only a few very large.
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European Journal of Human Genetics (2003) 11,
475488 www.nature.com/ejhg
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Banche Tessuti per la Ricerca in Italia

• Biorep privata, conservazione tessuti in conto
  terzi.
• Rete virtuale di banche oncologiche IRCCS (
  Alleanza contro il Cancro )
• Consorzio Banca Tessuti Umani ( inclusa brain
  banking ) di Tor Vergata, in fase di
  costituzione con IDI.
• Brain Banking per m. Jacob-Creutzfeld presso ISS.

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Considerazioni finali
Sociale
Legislativo
Organizzativo
Scientifico
SOP
Linee Guida
Approccio multidisciplinare!
40
(No Transcript)