????:???????DNA????

1
???? ?????????

• ??
• ??
• ???? ??
• (??) ?????????????
• ???? ??
• ??
• ???? ??
• (??) ????
• ??
• ??

2
??? ???????????

• ????
• ???????????DNA????
• ????????
• ???????????????????
• ???? ??
• ??
• ??
• ??

3

• 1.???????(??)?????(??)
• ??,?DNA?????????????
• ????
• . ????????????
• 2.?????DNA?????,???????
• ?????????
• ????????DNA ????(??)
• ??????DNA ????
• ??????
• 3.??????????????DNA?????
• ??????????
• ?????????  
•  

4

• 4.???????DNA??(????)
• ????? ????????
• ????
• ???? ???? ?????
• 
  ?????
• ??
  ????
• 
  ???
• a.???????????????
• b. ???
• ??????????????
• ?????????????
• ??????????(e.g????)

5
????

• ????????????,???DNA
• ??????????????
• 2.????(????)
• ??????????????
• (??DNA????,?????)
• ??
• a.?????
• b.?????

6
??? ????(??DNA?? )

• ???????????(??)???,
• ????????DNA??,
• ?????DNA??????,
• ??????????????
• ????DNA???DNA????
• DNA??????????DNA???
• ??(clone)????????????
• ?????????????
• ??? ??????????

7
???? ??????????????

• ??????
• ?
• ????
• ????
• ??

8

• (?)????
• ????????
• ????DNA?????,????
• ????????DNA???
• ?????.
• ??I?II(??)?III?
• ??
• II?? ?? ????DNA????
• ????
• ????
  5??
• 
  3??
• ????
• ????
  ?????,
• 
  ????

9
(?)????? ???????????????
??cDNA(??DNA) ???DNA ??
????? (????) ????DNA??
(?????DNA???) ? cDNA??
(???mRNA??) ? PCR (??????)

10
PCR????????????dNTP? ???DDRP???????(25-30)
??????????????????(????)????
11

• (?)????
• ???????????????????
• ????????????DNA???
• ? ??????????????
• ??
• ?? ??DNA pBR323
• ???DNApUC19
• ??
• ??DNA
• YAC( ????????? )

12
??????

• ?? ???(?)?????????
• 1.???????(???????) 
• 2.?????????? 
• (???????????,?????)
• 3.??????????
• 4.??DNA?????(??)?
• 5.??????(????????????)?
• 6.????????
• e.g ???????DNA??

13

• (?)????????
• ?? 1.??????
• DNA???
• 2.???DNA??????
• ??????
• 3.cDNA??????
• ???????????
• 4.PCR
• dNTP ????
• ???????

14

• (?)???????????
• a. ?????????????DNA?
• b. ?????????????,
• ???? (???)?????
• c. ????????????
• ?????????????

15

• (?)???????????
• ??
• ?????? ??DNA??
• DNA???
• ??
• ???? ?? ????????
• (?) ????????
• ?? ???????
  
• ??????
• ???? ??????????

16

• (?)????DNA?????
• ?? ??
• ??
• ??
• ??????????
• ?????????
• ?????
• ???????
• ??DNA?????,???????
• ??,??DNA??????? ???
• ???

17

• (?)???????
• ??(??)??????????
• ??(??)??,???
• ??????????????
• ??
• ??? ???????
• ????
• ?????
• ???? ?????
• 
  ???????

18

• (?)????????
• ??DNA????
• ???????? ????
• ??????(?????) ????
• ?????? ???????
• ???????
• ??????????
• ???????????????
• ????????
• ??????

19
????

• 1.??
• a. DNA??
• b. DNA?????
• ????
• ?????
• ?????
• ?? ?????
• ????????
• ??
• 2.??
• a. DNA??(????)
• e.g???????????(ex vivo)
• b. ????

20
????

• 1.???????(????)
• 2.??????
• 3.?????(????)
• 4.????(??????????)?
• ???? ????
• 5.??????(?????)
• 6.????(?????????
• ???????????)

21

• ??????(conjugation)
• ?????????????????
• ??,??DNA?????(??)???
• ????(??)?DNA?????????

22

23

24

• ??????(transformation)
• ??????????????DNA,
• ????????????????????

25

• ??????(transduction)
• ??????????(??)
• ????,????????(??) ?,??????????????
• ?DNA????????

26
???????????????????? ???DNA???????
? 15-3 ????
27

• ??????
• ????(insertion sequences,IS)
• ?750 1500bp
• ??
• ??????941bp,????
• ?????????????,????
• ??????412bp,???????? ??,????????

28

• ??
• 1. ?????
• ???????
• 2. ?????
• ???????,???????
• ??,?????????

29

• ?????

30

31
??????
????

???
?????
(???)
5'

5'
3'
3'
????????
??? (???)
5'
3'
3'
5'
? DNA (poly I) ??
??? (???)
?????
?? (???)
???
???
? 15-4 ??????????
32

• ?????
• ???(transposons)???????
• ?????????????????
• ??????
• ?? ?????
• ?????????????

33
??
5
3
3
5
???
5
3
5
3
5
5
5
3
3
3
recBCD
3
5
5
3
DNA?? recA
3
5
3
5
5
3
5
????
3
5
3
5
3
recA
3
5
5
3
??? recBCD
DNA ???
5
3
5
5
5
3
3
3
5
3
5
5
5
3
Holliday???
34
3
3
3
5
5
5
5
5
5
3
3
???
3
???
3
ruvC
ruvC
3
5
3
5
5
5
3
5
3
3
DNA ???
Holliday???
DNA ???
3
3
5
5
3
3
3
3
5
?15-6 ??????
3
3
35
(No Transcript)
36
Holliday???
37
??????

• ???????DNA?RNA?????,??,??,?????????????

38
? ? ? ? ? ?

• ? ? ? ? ? ? ? ?
  ?
• ???????? ?DNA?????????
• restriction endonucleases ??????????
• DNA??? ????????DNA?????
• DNA ligase
  ????????????????
• DNA???I ???3?????????????D
  NA??????
• DNA polymerase I ??,?5?3DNA??????3
  ?5?5?3?????
• ?????? ??????????????????
• DNA polymerase kinease 5-OH???
• ????
  ?RNA?DNA?????????cDNA?
• reverse transcriptase
• DNA????? ?????????????
• DNA terminal Deoxynuc ???DNA???3-OH???DNA?3
  -???dNTP
• leatidy transferase
• 
  
  (????)

39

• ? ? ? ? ?
  ? (????)
• ? ? ? ? ? ? ? ?
  ?
• ????? ??DNA,RNA,dNTP?5????
• BAP orCIP
• ?????III ??DNA3-OH????????
• exonuclease III
• ???S1 ????DNA?RNA,???5?????
  ???
• nuclease S1 ?????,????????????????
  ???Bal 31 ????DNA,RNA?5?3??,
• nuclease Bal31 ?????????
• Taq DNA ??? ????(72?)????DNA???,
• Taq DNA polymerase ?5?3??????????
• ????? ?????RNA
• RNase
• ??????? ?????,???????DNA
• DNase

40
???????????

• ??????????????,????
• ??I (?????,???????
• ????)
• ??II(??IIa????? IIb?
• ???)
• ??III ( ??I II?)

41

• II????????
• 1???????,
• 2????? 4-8 bP?
• 3???? DNA????? 5-GGATCC-3
• 3-CCTAGG-5

42
???????????

• ????????????????????????????????,?Eco(?Esherichia
  coli ??????????) Hin(?Haemaphilu
  influenzae???????????)?
• ??????????????EcoRI
• ????????????HindI.II,III

43
II????????????

• ?????????????????????????
• ???????5?????5??,
• 5----NG?AATTCN----3 EcoRI
  5----NG AATTCN----3
• 3----NCTTAA?GN----5
  3----NCTTAA GN----5 5??
  
• ?????????3?????3??,
• 5----NCTGCA?GN----3 PstI
  5----NCTGCA CN----3
• 3----NG?ACGTCN----5
  3----NG ACGTCN----5 3??
• ???????????????,??????
• 5----NCCC ? GGGN----3 SmaI
  5----NCCC GGGN----3
• 3----NGGG ? CCCN----5
  3----NGGG CCCN----5 ??

44

• 1.cDNA(complementary DNA)?????????,
• ?RNA?????DNA?
• ???cDNA???,?????cDNA?
• cDNA???mRNA ????cDNA,????
• ??cDNA,??????????
• ??????,??????mRNA
• ??????

45

• 2. ???DNA(genomic DNA)???????
• ??????????(???
• ????)???DNA???
• ??????????????DNA???
• ??????,????????
• ????????,??????
• ???DNA??????

46

• ????
• 1.?????????
• 2.?????,(????????,??????
• ???????)????????????
• 3.?????(??DNA???),
• ??????????,??????
• 4.????,????????DNA?

47

• 1. ??(plasmid)
• ?????????????????DNA
• ???????
• ? ??????
• ? 1 3???
• ? ??,???
• ? ??

48

??
49
396
? 15-7 ?? pUC19
50
(No Transcript)
51
???? ????
52

• 2.???(phage)DNA
• ? ???DNA????
• ? gt ??(???,??cDNA??)
• EMBL??(???,???????)
• M13???DNA????(?lac Z??)
• M13mp??
• pUC??

53

• ????DNA??????

54

• ??????

55
??????? (?????) ????????ampr?tetr?????tetr
???,?tetr????? ????????????????????????,?????

56

• ????
• ?????????????,??? ??????????????
• ????????????????

57
???????32P??????????????
??????DNA????DNA?????
???,???????????? ????
Southern??
58
????? ?? ?????
?????
????
???? (????DNA)
????? ????? ?????
1?32P?? 2??????
?15-10????
59
(No Transcript)
60

• 1. ??????
• E.coli??? ????
• ????
• ??????
• ???????
• E.coli??? ?????????
• ?????????
• ????????????
• ???????????

61

• 2. ??????
• ??????????????
• ????????cDNA??????DNA
• ???????????
• ????????
• ??????????????
• ????????????????

62
??

• ???? ?? ?? ??
• ??(???????????)
• ???? ?? ?? ????
• ?? ??