DNA

1
??? ??????????
2
??? ??????????
????
DNA
??
??????
??
?????
?????????
mRNA
??
???
????????
???
???
????
????
???
???????
????
??
????
3
??? ??????????
??? ?????????????
??? ??????????????
??? ??????????
??? ??????????
4
??? ?????????????
5
??? ?????????????

• ????
• protein genome proteome
• ??????????????
• ?????????????????????

6
???????????????

• ?????
• ??????????????????????
• ?????????????????????????????????????????,????????
  ?????????????????,??????????????????

7
??? ??????????????
8

??? ??????????????
??????
??????
9
?? ? ? ? ?
(?)????
(?)????
(?)???????????
(?)??????????
10
??? ? ? ?
(?)????

• ?????????
• ????

11
??? ? ? ?
(?)????

• ???
• ???
• ???

12
??? ? ? ?
(?)???????????

• ???????????????????? ????????????
• 1??????
• 2??????
• ?????
• ????
• ??????

13
(No Transcript)
14
(No Transcript)
15
??? ? ? ?

• 3 ?????
• ?????
• ??????

16
4 ??????????? ????
17
(?) ??????????
?? ? ? ? ?

• ???
• ??????????
• ???
• ???
• ??????
• ????
• ???????? ??
• ??
• 
  

18
??????

• (?)Western????
• ??????
• ???????
• SDS-?????????
• ???????
• ???????????
• ????????

western ????????
19
Western????
???????????????
? ????
??SDS-????????????????????????????,???????????????
,????????????????????????????,?????????????
??????????????????????????????A??????????????????
??
20
???????????? GAPDH?ACTIN?ALBUMIN
21
? ??

• ?SDS-PAGE???????????????
• ????????? (?????ng?)
• ????????????,????????
• ???????????????

22
?????(immunofluorescence)
??????????????????
? ????
????????????,???????,????????????(????)????,??????
???????????(????)????,????????????????????????,???
??????,??????????
? ??
? ????????????? ? ??????????? ?
????,?????????
23
?????(immunofluorescence)
? 1
? 2
24
????(immunoprecipitation)??
? ????
????????????????(?Protein A, Protein
G?),???-???????????????,??????????
? ????
? ???????????,????????? ? ??????????? (?
Protein A-????) ? ????,?Protein
A?????-????????? ? ?????????????????
???????,??????,??????????
25
????? (co-IP)??
??????X????????,?????X???????X,????Y????????
Y???????????????(co-immunocipitation,
Co-IP),??????????????????????
???? ????????X
26
(?)??????(2-DE)
??????

• ??????????????????????
• ?????
• ???????????
• ?????????
• ???SDS-?????????
• ??????????

27
??????(2D electrophoresis)
? ????
??????????????
IEF-focused proteins
SDS-charged proteins in IPG strip
SDS-charged proteins resolved according to sizes
in SDS-PAGE gel
28
2-DE?????
??????
29
2-DE???????
??????
??? ?? ?? ?? ???? ???
???? pK??? ???? ???? pH??? ???? ???? ????
????? IPG-IFE ?? ????? SDS-PAGE
???? ???? ???? ???
??
????
IPG???
????
30
2-DE????????
??????
31
??????(2D electrophoresis)
silver staining (3000 spots)
????????????????? ????,??,????????????????????
????????(???????????)?
32
?????

• ???????
• ??????????????
• ??

33
??????
(?)??????

• ??2-DE??????????,????????????????????????
  ???????????????????

34
??????

• 2-DE???????????

????
????
????
??????????
?????????
35
??????

• ????????????

???? D0????
???? D8????
?????
???????
????-??????
?????????????????
36
????(protein chip)??
?????????????????????????
??????????????????????????,?????????????,????
??????????????????????????????
37
????(protein chip)??
? ????
? ?????????????(???,???)??????
?,???????????????????????? ? ??????????(????????)
??? ? ???????(EAM)EAM???????????,???
??????????? ? ?????????????(SELDI)???????????
???? ? ???????????????????????????
38
????(protein chip) ??

• ?????????????????????
• ???????????????
• ???????? (1-50 fmole????)
• ???????(0.5 µl)????(400µl)
• ????????

39
????(protein chip) ??
? ProteinChip???
40
?????
41
??????
(?)????

• ??
• ????????,???????????
• ????(???,m/e)?????????
• ??
• ????????
• ????????

42
(?) ????
??????

• Edman????????????????
• ????(NMR)??????????????
• ??????
• X?????????????????????
• ????????

43
??? ??????????
?????-???
?????-?????????
44
?????-???
(?)???-??????????
(?)???????????
(?)????????????
45
?????-???

• (?)???-??????????
• 1?????????
• 2?????
• 3?????
• 4????????
• 5??????

46
(?)???????????

• ??
• ????
• ???
• ???

47
(?)????????????

• 1????????

2??????
3?????????
4???????
48

• ???????
• ????
• ????
• ??
• ?????
• ?????
• ????????
• ?????????????

????
????
???
49
1????????

• DNA-BD???????????????????,DNA-AD???????????

????
??????????
50

• DNA-BD?DNA-AD?????????,????????????,????????????
• ???proteinX?proteinY????????,???????????,?????????
  ????? ?

??????????
51
?????(yeast two hybrid)
? ?????????
? ???????
??cDNA????????????????????
52
2??????(phage display)

• ????????????
• ????????????
• ????????????
• ?????????????
• ????????????,
• ???????????

???????????
53
3?????????

• ??????????(SPR)?????????????????(BIA)?MALDI-TOF???
  ?????????
• ????????????????????????

54
4??????????????

• ????????????????????????????????,????????????????
  ???
• ?????????????????????,????????????????????????????
  ???

55
?????-??
(?)??????
(?)????
(?)?????
(?)DNase???
(?)??-?????
56
?????-??

• (?)??????
• ????????????????????,??????????????????????????,??
  ???????
• ???????????????????

????????????
57
DNA-????????
????? (gel retardation)
???Band shift assay?Gel shift assay?
? ????
?????????????????,????????????????????????????????
??,??????????????????????????????????,????????????
????
58

• ? ??????????DNA????????
• ? ??DNA?????????
• ? ?????????????????????

59
DNA-????????
? ??
?????????????????? ????DNA???????????DNA???????? ?
????????????????????????? ????????????????????
??????????????????DNA??????
60
DNA-????????
61
(?)?????
?????-??

• ???????????????DNA,???????????,????????D
  NA?????DNA??????

62
(?)?????
?????-??
DNA??????? ???????

• ???????DNA??????????????DNA???????????????,??????
  ???????DNA??????????

???????????? ?DNA-??? ???????
???????? ?????
DNA???????
????????????
63
??????? (methylation interference assay)
? ????
???????(DMS)?DNA????????G?A?????,???????G?A,???DNA
??????????DNA?????????????????????,??????????DNA?
?????????????DNA?????????
64

• ??????DNA????????????,??????,????????DNA??????????
  ??,???????DNA????????????????,???????????????????
  

65
? ????

• ??????DNA???????????????????
• ??????DNA??,????DNA??????
• ??????????DNA???DNA-????????,???
• ??????????????????????,?????

66
DNA-??????????
????
67
DNA-??????????
DNase I???? (DNase I footprint analysis)
???DNase I ????,?????DNA?????DNA??????????????
? ????
DNA?????????DNA???????,?????????DNA????DNaseI????
? ????
? ?????DNA??????????????????? ?
???????,????????DNA????? ? ?????DNaseI??????,?DNA
??????????????? ? ???????????????????,?????,?????
???????????DNA???
68

• DNase ???????????????????????????
• ??DNase ?????????????????,?DNA??????,????????DNA?
  ?DNase?????

69
DNA-??????????
DNA????
DNA??????
?
?
70

• DNase??????????

71
(?)??-???????
?????-??

• ????????DNA???????????????????
• ????

?????
SDS-PAGE
?????
SDS-PAGE
???NC??Nylon?
???????????
????????DNA?????
???????????
????????DNA?????
????
????
?????
TBE????DNA?????
72
Southwestern ??
????-???????,??????????DNA????????????????
? ????
?????????SDS-??????????????????????????,??????????
?????DNA??(??),??????????DNA???????,??????????????
??????,????????????????DNA?????,????????????
73
??? ??????????
74
??? ??????????
????????(Protein Database)
???????????
75
????????
(?)????????
(?)????????
(?)???????????
(?)DIP???
76
????????

• (?)????????
• SWISS-PROT???
• http//www.ebi.ac.uk/swissprot
• PIR?PSD???
• http//pir.georgetown.edu/
• ftp//nbrfa.georgetown.edu/pir

77
????????
(?)????????

• ???????
• http//www.rcsb.org/pdb/
• ??????????
• http//scop.mrc-lmb.cam.ac.uk/scop/
• PROSITE???
• http//www.expasy.ch/proside/

78

• (?)????????(COGs)???
• http//www.ncbi.nlm.nih.gov/COG
• (?)DIP???(DIP Database)
• http//dip.doe-mbi.ucla.edu/

????????
79
???????????

• (?)????
• ??????
• ?????
• (?)????
• (?)?????????

80
(No Transcript)
81
(No Transcript)
82
(No Transcript)
83
(No Transcript)
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(No Transcript)
85
(No Transcript)