LIGNEE THROMBOCYTAIRE

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LIGNEE THROMBOCYTAIRE
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I-INTRODUCTION

• 1. DEFINITION
• THROMBOPOIÈSE
• production et la mise en circulation des
  plaquettes sanguine ou thrombocytes à partir des
  précurseurs medullaires mégacaryocte
• Elle se localise au niveau de la moelle osseuse
  (MO )

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I-INTRODUCTION

• 1. DEFINITION
• Les mégacaryocytes sont les cellules nuclés les
  plus grandes ( 10 65 µm de diamétre), et les
  plus rares de la moelle osseuse.( 0,5 )
• Les plaquettes sont des cellules anucléés
• Rôle important dans les phénomènes dhémostase

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I-INTRODUCTION

• 2. ASPECTS DE LA LIGNÉE
• PROGENITEURS
• PRECURSEURS
• LIBERATION DES PLAQUETTES
• REGULATION
• EXPLORATION ET DESORDRES

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II-Etape de différentiation de la lignée
mégacaryocytaire

• les cellules de lignée mégacaryocytaire
• proviennent de la cellule souche pluripotente
• CFU S

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(No Transcript)
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II-Etape de différentiation de la lignée
mégacaryocytaire

• La maturation des mégacaryocytes se fait par
  endomitose dédoublement succéssif de lADN sans
  division cytoplasmique
• Formation des cellules géantes
  polyploïdes de 4 à 64 N Chromosomes avec un
  moyenne de 16 N.

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II-Etape de différentiation de la lignée
mégacaryocytaire

• Au cours de la maturation , on assiste à une
  lobulation et à une condensation progresse du
  noyau .
• Parallèlement à cette ploïdie, se fait la
  maturation du cytoplasme du mégacaryocyte qui

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II-Etape de différentiation de la lignée
mégacaryocytaire

• - Augmentation de la taille
• - Passe de la basophilie à lacidophilie
• - Formation des granules denses, granules alpha,
  lysosomes, système tubulaire dense
• - Apparition des GP de surface de la membrane
• GP IIb, GP IIIa
• - Synthèse de la PPO, à partir du stade de
  mégacaryocyte

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III-PROGENITEURS

• 1. BFU-MK ( Burst forming unit Megakaryocyte)
• Génère en 21 jours de culture des colonies de
  plus 50 MK
• 80 en phase G 0,
• Potentiel prolifératif important
• CD 34 , HLA DR

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III-PROGENITEURS

• 2. CFU-MK ( Colony forming unit Megakaryocyte)
• Génère en 7 jours de culture des colonies de 4 à
  32 MK
• Plus de 70 en phase G 0,
• Potentiel prolifératif restreint
• CD 34 , HLA DR
• 10 à 20 / 10 5 cellules médullaires

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IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES

• sont
• le promégacaryoblaste et
• les cellules morphologiquement
• reconnaissables

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IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES

• 1. Promégacaryoblaste
• cellule non reconnu morphologiquement sur le
  myélogramme.
• 15 à 18 µm
• Rapport N/C élevé
• Noyau sphérique, nucléolé
• Perte quasi totale du pouvoir prolifératif
• Début de lendomitose ( polyploidisation) 2 à 8
  N
• CD 34 , HLA DR, peroxydase plaquettaire (PPO)
• CD 41-, ( GP IIb/ IIIa) -
• 20 à 30 / 10 5 cellules médullaires

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IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES

• 2. cellules reconnaisables morphologiquement
• . 4 stades de maturation nucléocytopasmique sans
  division
• Mégacaryoblaste
• Mégacaryocyte basophile
• Mégacaryocyte granuleux
• Mégacaryocyte plaquettogène
• . 0,5 des élements médullaires

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IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES

• . Marqueurs
• PPO
• CD 41
• CD 42 ( GP Ib)
• CD 36 ( GP IV)

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IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES

• a) Mégacaryoblaste 20 de la lignée
• Frottis médullaire MGG Microscopie optique
• 25 à 30 µm
• Rapport N/C élevé
• Noyau non segmenté
• Chromatine à trame grossière 1 à 2 nucléoles
• Cytoplasme basophile
• Absence de granulations
• CD 34 -, HLA DR faible
• Mégacaryocyte de ploïdie variable 2N à 64 N
• 2/3 à 16 N , ¼ à 32 N
• -Chacun de ces stades subira une maturation
  cytoplasmique

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Aspect général taille 25 à 30 µmforme irrégulière
Noyau taille N/P gtgt 1forme  ovalaire parfois déjà binuclééaspect de la chromatine  légère, nucléolée, grossière et filamenteuse 
Cytoplasme affinité basophile sans granulations  Mégacaryoblaste
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IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES

• b) Mégacaryocyte basophile 25 de la lignée
• 30 à 40 µm
• Rapport N/C moins élevé
• Noyau non segmenté ou non
• Chromatine grossière pas de nucléoles visible
• Cytoplasme plus abondant et moins basophile
• Granulations azurophiles ( futures granulations
  plaquettaires)

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Aspect général taille  50 µmforme irrégulière
Noyau taille N/P gt 1forme  polynucléé (noyaux ovalaires) aspect de la chromatine  moyennement condensée, grossière et filamenteuse
Cytoplasme affinité basophilerares granulations azurophiles près du noyau  Mégacaryocyte basophile
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IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES

• c) Mégacaryocyte granuleux 55 de la lignée
• 40 à 60 µm
• Rapport N/C faible
• Noyau polylobé
• Chromatine dense et irrégulière
• Cytoplasme acidophile
• nombreuses granulations azurophiles à
  localisation plus centrale.
• - Nombreuses membranes de démarcation délimitant
  les futures membranes plaquettaires avec les
  granules

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Aspect général taille 50 à 80 µmforme irrégulière
Noyau taille N/P inf à 1 forme  multinucléé aspect de la chromatine  condensée en gros filaments
Cytoplasme affinité acidophiletrès nombreuses granulations dispersées Mégacaryocyte granuleux
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IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES

• d) Mégacaryocyte plaquettogène 5 de la lignée
• 40 à 60 µm
• Noyau polylobé, picnotique
• Cytoplasme très acidophile avec processus de
  fragmentation ( émission des pseudopodes)
• Granulations azurophiles groupées en amas
• ( 10 à 12 / amas)

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Aspect général taille  allant jusqu'à 100 ou 150 µmforme irrégulière
Noyau taille N/P lt 1 forme  multinuclééeaspect de la chromatine très condensée, picnotique 
Cytoplasme affinité acidophile claircloisonnement des granulations formant les futures plaquettes (surtout en amas organisés à la périphérie de la cellule) Mégacaryocyte thrombocytogéne
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• e) Plaquettes Eléments circulants
• Frottis coloré au MGG MO
• Cellule anucléé , discoïde
• Zone centrale Granulomère
• Zone périphérique Hyalomère

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Aspect général taille 1 à 3 µm (plus grosses
sur anticoagulant)forme irrégulière Cytoplasme
affinité basophile clairgranulations
nombreuses, moyennes, dispersées et azurophiles 
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• e) Plaquettes Microscopie électronique
• 1. Membrane plaquettaire
• - Phospholipide
• - GP membranaires Rôle important dans
  lhémostase
• GP IB, GP IIb-IIIa, GP V

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• 2. constituants internes
• a)- Actomyosine
• b)- Microtibules et filaments
• c)- Système membranaires
• SCO Système caniculaire ouvert
• STD Système tubulaire dense

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• d) les granules
• les granules denses
• ATP, Adrénaline et sérotonine, Ca
• Les granules alpha
• Facteurs de la coagulation Fibrinogène, V , VIII
• Facteurs spécifiques de la plaquette
• PF3, PF4, TGF B, PDG F, Fact plaquettaire
  mitogène

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• Les granules lysosomiaux
• Très riche en enzyme
• Hydrolase acide
• collagénase
• Phosphatase acide
• aryl sulfatase
• Protéase.

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Microscopie Electronique

• Noyau Maturation
• - Lobulation
• - Condensation de la chromatine
• - Augmentation de la ploïdie

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Microscopie Electronique

• - RE
• - Appareil de Golgi
• - Apparition progressive des membranes de
  démarcation Cytoplasme
• - Granules alpha et granules denses
• - lysosomes
• - Péroxysomes
• - GP membranaires GP II b GP III a

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V- FORMATION DES PLAQUETTES

• 1. Site de libération des plaquettes
• - Projections des pseudopodes mégacaryocytaires
  au travers de la monocouche endothéliale du sinus
  médullaire et libération des proplaquettes puis
  des plaquettes sous laction des forces de
  cisaillement ( ).
• - Fragmentation au niveau de la microcirculation
  pulmonaire ( 10 à 15 )
• - Rupture médullaire des mégacaryocytes.

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V- FORMATION DES PLAQUETTES

• 2. Cinétique
• La durée du transit médullaire entre
  mégacaryoblaste et PLT est de 8 à 12 jours (
  Thymidine tritiée)
• 1 mégacaryocyte produit 2 000 à 3 000 Plaquettes
• leur durée est de 8 J
• ( Chrome 51, Indium 111)
• 30 des PLT sont dans la rate.

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V- FORMATION DES PLAQUETTES

• Deux propriétés majeurs des plaquettes
• Adhésion et agrégation
• Hémostase
• Augmentation de la réaction inflammatoire
• Activation de complexes immuns
• Dissémination métastatiques

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VI- RÉGULATION

• 1. Régulation positive
• Thrombopoiètine TPO
• Structure
• Gène 3q26-27,
• Protéine hydrophobe de PM 35 38 Kd
• Protéine mature(332aa) en 2 domaines
• Domaine actif, homologie avec lEPO
• Domaine glycosylé, indispensable à la sécrétion
  de la TPO

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VI- RÉGULATION

• Synthèse
• Foie ,
• Cellules stromales, rein, muscles, testicules et
  cerveau
• Production inversement proportionnelle à
• la masse plaquettaire circulante et
• la richesse mégacaryocytaire

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VI- RÉGULATION

• TPO
• Prolifération des progéniteurs mégacaryocytaires
• ( BFU-MK, CFU- MK)
• Croissance et différentiation des mégacaryocytes
• Augmentation de la production des plaquettes.

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VI- RÉGULATION

• b) IL 3, IL 6, GM-CSF, EPO
• Favorisent
• la prolifération et
• la maturation des mégacaryocytes

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VI- RÉGULATION

• 2. Régulation négative
• TGFb1 Transforming growth factor effet direct
  important sur les Progéniteurs MK
• PF4 ( Chimiokine) effet inhibiteur des
  CFU-MK
• thrombine effet inhibiteur sur la formation
  des proplaquettes.
• IFNa rôle mineur
• Inhibent la prolifération et la maturation des
  progéniteurs MK
• Inhibent la maturation des mégacaryocytes

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VI- RÉGULATION

• 3. Rôle du microenvironnement et des facteurs de
  transcription

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VII- EXPLORATION

• Numération des PLT
• Manuelle ou sur un automate
• toujours suivie dun contrôle sur frottis sanguin
  pour éliminer les fausses thrombopénies
• Liée à la présence damas plaquettaire
• Au besoin refaire la numération sur tube citraté
• Élimine les fausses thrombopénies par
  agglutination des PLT in vitro.

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VII- EXPLORATION

• 1. Hémogramme et morphologie
• a)Taux de PLT 150 à 400 giga/l
• b) La coloration MGG permet dapprecier
• la morphologie (taille, et dégranulations des
  PLT)
• De contrôler les fausses thrombopénies
• c) thrombopénies induites par lhéparine
• d) Satellitisme plaquettaire (assez rare,
• 1/10 000),avec formation des  rosettes 
  plaquettaires autour dun PNN, visible sur
  frottis.

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VII- EXPLORATION

• 2. Myélogramme
• Réalisé en cas de thrombopénie réelle
• Létude cytologique de la moelle osseuse ( MO )
  permet

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VII- EXPLORATION

• 1. Apprécier la richesse de la MO en MK
• Si MO riche Thrombopénie périphérique
• Si MO pauvre Thrombopénie centrale
• ( aplasie ou envahissement)
• 2. Etude qualitative des mégacaryocytes pour
  apprécier leur maturation
• - Présence ou non de mégacaryocytes
  thrombocytogéne

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VII- EXPLORATION

• 3. Biopsie de la moelle osseuse BOM
• Donne une estimation plus précise sur la présence
  damas MK.
• 4. Ultrastructure en microscopie électronique
• - PPO
• - Granules
• - Membranes
• - Cytoplasme

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VII- EXPLORATION

• 5. Etude in vitro des fonctions plaquettaires
• Rôle dans lhémostase primaire
• - Adhésion plaquettaire
• - changement de forme
• - Réaction de libération
• - Agrégation plaquettaire
• - Rétraction du caillot

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VII- EXPLORATION

• b) Rôle dans la coagulation
• Action procoagulante par le PF3 qui constitue le
  support phospholipidique
• Activation des facteurs de la coagulation

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VII- EXPLORATION

• c) Rôle dans la réaction inflammatoire
• - Dégranulations des plaquettes en présence des
  
• bactéries
• Complexes immuns
• virus
• - Libération de leur contenu granulaire
• d) Rôle majeur dans la thrombose artérielle et
  dans linstalation de lathérôme

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VII- EXPLORATION

• 6. Recherche des Ac héparine- PF4
• 7. Culture des progéniteurs
• 8. Cytométrie en flux en hématologie moléculaire

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VIII- Désordres

• Valeurs normales
• 150 000 - 400 000 / MM 3
• Toute diminution Thrombopénie
• Toute augmentation Thrombocytose