Dr. Carlos D

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Pruebas Inmunológicas en Enfermedades infecciosas

• Dr. Carlos Díaz Olachea
• 2005

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Pruebas Inmunológicas en Enfermedades infecciosas

• Termino aplicado en Patología Clínica a la
  metodología empleada en la detección de
  enfermedades infecciosas pueden ser
• Detección de Antígenos directos
• Detección de la respuesta inmune (Anticuerpos ó
  células sensibilizadas) del huésped al antígeno
  específico
• Detección indirecta de respuesta inmune a otros
  antígenos( Reacción cruzada)

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Pruebas Inmunológicas en Enfermedades infecciosas

• Se describen ejemplos más frecuentes
• ASLO
• Diagnóstico de EBV
• Reacciones Febriles
• Rotavirus
• H. Pylori
• Otras que se discutirán en la sección especifica
  del programa son
• Infecciones virales exantemáticas
• Hepatitis viral
• TB
• Hongos
• Etc.

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Antiestreptolisinas O (ASLO)

• Son anticuerpos contra estreptococo beta
  hemolítico del grupo A
• Indican solo exposición al Estreptococo beta
  hemolítico del gpo. A
• Aparece a la semana de infección, pico máximo a
  las 3 semanas
• Utilidad clínica asociada a complicaciones
  secundarias del estreptococo como Escarlatina, F.
  Reumática, Glomérulo nefritis, Endocarditis
  bacteriana.
• NO es específico

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(No Transcript)
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Antiestreptolisinas O (ASLO)técnica

• Inhibición de la hemoaglutinación
• Aglutinación látex
• Valores de referencia
• Adultos lt 160 U/ml Todd
• lt de 2 años lt 50
• de 2 a 4 años lt 160
• de 4 a 12 años entre 160 300
• Alterados por esteroides, uso de antibióticos y
  beta lipoproteína
• Substituida por pruebas rápidas

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(No Transcript)
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EBV

• Manifestación clínica primaria Faringitis y
  Linfocitosis, Esplenomegalia ó Hepatitis y Fiebre
  prolongada.
• Normalmente en lt de 10 años, subclínica
• Adolescencia MI (Fiebre glandular) 4-7 semanas de
  incubación, inicio insidioso, fiebre fluctuante,
  faringitis, linfadenopatía y hepato
  esplenomegalia.
• Dura varias semanas, raro meses.
• 90 de adulto tienen Acs. Contra el
• Reactivación
• Eliminación de virus en saliva
• Linfoproliferación B
• Inmunosupresión y linfoproliferación
• Neumonitis y afectación de SNC es raro.

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ÉBV Infección Latente
LCT
Replicación
L NK
En inmunodepresión aparece Mononucleosis
Infecciosa Linfomas tipo Hodking, Linfomas
Inmunoblasticos Linfomas Burkitts CUCI Etc.
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(No Transcript)
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EBV Diagnóstico

• Cuadro Clínico de presentación
• Citometria hematica con linfocitosis atípicos gt
  30, neutropenia y trombocitopenia ocasional
• Enzimas hepáticas elevadas
• Acs. Heterofilos (monotest, mospot)
• Acs. Que dan reacción cruzada co GR de carnero y
  caballo. Especificidad de 95
• Positiva en 30 niños lt 2 años y gt 2 a 4 años
  90 . Japoneses negativa
• Falsos positivos en Linfoma y enfermedades
  autoinmunes.
• Títulos de Acs. Específicos IgM
• PCR

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EBV Diagnóstico

• Componentes virales
• Antigeno del capside (VCA) IgG e IgM () en
  enfermedad temprana
• Antigeno temprano (EA) () en enfermedad temprana
  y convalecencia
• Antigeno nuclear (NA) () en convalecencia y
  reactivación crónica
• El VCA es producido por linfos B infectados se
  encuentra en citoplasma, el IgM se encuentra a
  las 4 7 días de infección a conc. Bajas
  desaparece a los 2 meses
• Ideal PCR carga viral

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Las Reacciones FebrilesPruebas de laboratorio

• Grupo de pruebas de aglutinación de antígenos
  bacterianos por anticuerpos presentes en el suero
  de pacientes con enfermedades infecciosas no
  relacionadas.
• Reacción de Widal
• Reacción de Hudleson
• Reacción de Weil Felix
• Tularemia

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Reacciones FebrilesMetodología

• Uso de suspensiones de bacterias tratadas
  (atenuadas) previamente identificadas.
• Suero de paciente
• Placas ó tubos
• Observación de aglutinación
• Actualmente se agrega a algunas un medio de
  identificación macroscópica como el Rosa de
  Bengala

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(No Transcript)
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Reacción de Widal

• Diseñadas para infecciones por Salmonella
• S. Tiphy
• S. Enteritidis
• Antígenos
• Tifico O Somático
• Tifico H Flagelar
• Vi
• Paratifico A
• Paratifico B
• Antígeno C
• Antígeno E
• Sin embargo todos los antígenos dan reacciones
  cruzadas en zonas endemicas.

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Interpretación

• Títulos de Tifico O de 1160 ó mayores
• Títulos de Tifico O, H, Paratifico A ó B que
  aumenten 3-4 veces el valor inicial en 2 ó más
  determinaciones en el transcurso de la
  enfermedad, en zonas endémicas.
• Zona NO endémica cualquier título es positivo.

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Reacción de Widal

• Falsas Negativas
• Falta de respuesta inmune en el 30 de los casos
• Uso de antibióticos que inhibe la respuesta
  inmune
• Tiempo inadecuado para la determinación (lo más
  frecuente)
• falta de estandarización comercial de los
  antígenos.
• Error de laboratorio ( fenómeno de Zona)

• Falsas positivas
• Inmunización previa con vacuna tifoidica
• Hepatitis aguda y crónica
• Endocarditis estreptococcica
• Brucelosis
• Infección por bacterias Gram negativas
• Salmonelosis

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(No Transcript)
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Reacción de WidalConclusiones

• No substituye los cultivos
• No es específica
• No estandarizada
• Difícil interpretación
• La negatividad no descarta la enfermedad

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Reacción de Hudleson

• Después del cultivo son las pruebas más
  específicas para el diagnóstico de Brucelosis.
• De las reacciones febriles son las más útiles y
  confiables

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(No Transcript)
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Reacción de Hudleson

• Se utiliza una suspensión de Brucella Abortus
  para la investigación en suero del paciente
  anticuerpos contra las tres especies comunes de
  Brucella Suis , Mellitensis y Abortus.
• Métodos usados son Aglutinación en placa, tubo,
  IEA, ELISA.

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Reacción de HudlesonInterpretación

• Títulos de 1160 ó mayores son diagnósticos en
  zonas endémicas
• Para Banco de sangre en donadores sanguíneos
  cualquier título es positivo.
• Los títulos ascenderán en 2 ó más determinaciones
  durante la enfermedad.
• Un resultado negativo no descarta el diagnóstico.

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Reacción de Hudleson

• Los anticuerpos aparecen en relación a la
  bacteremia y alcanzan títulos altos (miles)
• Al alcanzar el nivel máximo puede ocurrir
• Disminución gradual con desaparición en 6 meses a
  un año.
• Normalizarse y luego ascender
• Producir espigas intermitentes sin normalización
• Negativizarse por bloqueo (zona)

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(No Transcript)
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Reacción de Hudleson

• falsas negativas

• Falsas positivas
• Memoria inmunologica
• Reacción cruzada con otras enfermedades
• Idiopatica
• Error de laboratorio

• Respuesta inmune inadecuada (30)
• Fenómeno de zona
• Anticuerpos bloqueadores
• Uso de antibióticos
• Defectos técnicos

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Reacción de Weil Felix

• Son pruebas de aglutinación catalogadas como NO
  específicas, porque la intención de la prueba es
  la búsqueda de anticuerpos contra ciertas cepas
  de bacterias del tipo del Proteus.
• La reacción clásica utiliza cepas de Proteus
  OX19, Proteus OXK, Proteus OX2.

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Reacción de Weil Felix

• En las Rikettsiosis los anticuerpos aumentan en
  la 2da. Semana y alcanzan su máximo en la 3a. Y
  5ta semana y desaparecen en 1 a 2 meses.
• Aumentos de los títulos de 2 a 4 veces en 4 a 7
  días de diferencia es la base del diagnóstico.
• Los títulos siempre son altos gt 1000

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Reacción de Weil Felix

• Falsas Negativas
• Falta de respuesta Inmune
• Uso de Antibióticos

• Falsas Positivas
• Infecciones por Proteus, predominantes en vías
  urinarias .
• Reacción cruzada con otras enfermedades
  infecciosas y auto inmunes.

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RotavirusNorwalk virus

• Afecta más de 130 millones de niños anualmente en
  el mundo y produce una mortalidad de 1 millon.
  (ASM News 64, 1998)
• La detección de antigenos en heces en niños de 2
  meses a 3 años causa más común de diarrea (
  30-40 de las GEV).
• Contaminación oro-fecal
• Solo útil en periodo agudo de diarrea inicio de
  síntomas 4 48h.
• Em Mayores de 3 años 90 tienen Acs. IgG.
• Sensibilidad 100 y VPP amplio de 57.7 93.7
• Journal of Clinical Microbiology, December 2001,
  p. 4532-4534, Vol. 39, No. 12
• MMWR, 3/99, Vol. 48.
• Pediatric Infectious Disease Journal.
  22(9)808-814, September 2003

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(No Transcript)
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Rotavirus Prueba ( ICG ) inmunocromatografica S
ensilidad 100 Especificidad 97.3
Positivo
Negativo
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Helicobacter Pylori

• El Helicobater pylori (H.pylori) es una bacteria
  microaerófila, espiroidea, que coloniza
  primeramente la mucosa gastrica antral, donde
  produce una inflamación aguda y crónica
  denominada gastritis crónica activa.
• El nicho ecológico en los seres humanos parece
  estar restrigido al estómago y al duodeno.
• Fue descubierto por Marshall y Warren hace más de
  20 años y es reconocido como uno de los patógenos
  más comunes y médicamente más importantes de todo
  el mundo.
• El Helicobacter pylori es una infección común,
  donde el 50 de los adultos de mediana edad han
  sido infectados con ella. Tiende a propagarse
  entre personas que viven juntas, que comparten la
  comida y los baños.
• Se diagnostica por exámenes de laboratorio como
  Análisis de sangre.
• Análisis de aliento de urea.
• Análisis de heces.
• Endoscopía.

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Helicobacter Pylori

• Después de infectarse con H.pylori la mayoría de
  las personas desarrolla gastritis, una
  inflamación del revestimiento del estómago. Sin
  embargo la mayoría de las personas nunca tienen
  síntomas o problemas relacionados con la
  infección, cuando los síntomas estan presentes
  pueden incluir
• Dolor sordo
• Pérdida de peso.
• Pérdida de apetito.
• Pesadez de estómago.
• Eructos.
• Náuseas.
• Vómitos

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Pruebas inmunocromatografica para Suero y heces
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Pruebas inmunocromatografica para Suero y heces
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Pruebas inmunocromatografica para Suero y heces
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HELICOBACTER PYLORI EN ALIENTO

• Principio de la prueba
• Consiste en administrar al paciente una cápsula
  conteniendo urea marcada con Carbono (C 14) 14
  en presencia de H. pylori la urea marcada se
  convierte en amonio e ión de bicarbonato, el cual
  lleva el carbono marcado. Más tarde pasa la
  circulación y es excretada a través de los
  pulmones.
• La prueba de aliento con urea implica le
  recolección de una muestra de aliento 15 minutos
  después de beber una solución con C 14. si H.
  pylori está presente, su enzima ureasa
  hidrolizará la urea en CO2, que finalmente será
  excretada en el aliento. Pueden presentarse
  resultados negativos falsos si la prueba se hace
  dentro de la semana siguiente de haber tomado
  inhibridos de bomba de protones, bismuto o
  antibióticos, o después de una cirugía gástrica.

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Comparación de métodos
Espécimen Sensibilidad Especificidad VPP VPN Prevalencia
Heces 94.87 95.33 69.81 99.39 10.20
Suero 50 82.96 13.88 96.79 5.2
Aliento 9.09 93.42 16.6 87.65 12.64
En Lab del HSJ-2005
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Evaluación de Artritis

• Pcr ó VSG
• Factor Reumatoide
• Tipo de HLA
• ANA
• Pruebas para LES
• Anti DNA y Sm
• Complemento
• Citometría Hematica
• Química sanguinea

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Artritis Reumatoide

• La AR se caracteriza por ser crónica, bilateral y
  simétrica, erosión articular y periarticular,
  nódulos subcutáneos, vasculitis.
• Asociación con DR4 y DR1
• Marcadores
• Factor reumatoide
• Anticuerpo antiqueratina
• Factor antiperinuclear
• Anticuerpos asociados a antígeno nuclear (RANA)
• Anti RA33

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Artritis Reumatoide

• Inflamación de tres ó más articulaciones pos gt 6
  semanas
• Inflamación de muñecas, cadera ó rodillas por gt 6
  semanas
• Dolor e inflamación matutina por una hora y por
  gt6 semanas
• Cambios en manos y radiografías de AR ( erosión y
  descalcificación )
• Nódulos reumatoides
• Factor reumatoide positivo ( normal en 5 )
• Se requieren al menos 4 criterios.
• Arnett et.al. Arth. Rheum 30S17, 1987)

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Artritis ReumatoideFactor reumatoide (FR)

• Ig tipo IgM(IgA ó IgG) anti fracción Fc de la
  IgG.
• Detección por aglutinación, Elisa, Nefelometría.
• FR se asemeja la proteína A de estafilococo
  aureus
• Positivo en
• 50-90 de AR
• 75 de SS
• 60 MCTD
• 35 LES

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Positivo Negativo
Factor reumatoide por aglutinación