El splicing de oskar mRNA esta acoplado con su localizaci

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El splicing de oskar mRNA esta acoplado con su
localización citoplasmática
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• Y14 y Mago se colocalizan con oskar mRNA en el
  polo posterior del oocito de D. melanogaster.
• La correcta localización del transcrito de oskar
  es esencial para el desarrollo del abdomen (y
  para la línea germinal).

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(No Transcript)
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Heterodímero Y14 y Mago forman parte del EJC.
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• Splicing del primer intrón de oskar mRNA es
  esencial para su correcta localización.
• Contradicción con la suficiencia de la región 3
  UTR para la correcta localización? Puede que los
  anteriores trabajos estuviesen afectados por
  transcritos de oskar endógenos.

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Efectos de diferentes oskar mRNA con intrones
delecionados (en oskA87/Df(3R)pXT103)
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Efectos de diferentes oskar mRNA con intrones
delecionados (en oskA87/Df(3R)pXT103)

• osk?i(1,2,3)?transporte correcto, pero difuso a
  partir del estadío 8 aunque hay la misma cantidad
  de transcrito. 2/3 de los huevos no eclosionan.
  Poca traducción.

• Transcritos transgénicos con i1 oskWT, osk?i2 ,
  osk?i3 y osk?i(2,3) ? correctamente localizados.
  Suficiente para que Y14 se asocie con el
  transcrito.

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• Transcritos transgénicos sin i1 osk?i1
  osk?i(1,2) osk?i(1,3) ? no se localiza en el
  polo posterior en los estadios 9 y 10 aunque el
  splicing de i2 y i3 sea correcto.

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Conclusión

• i1 tiene una función diferente de i2 y i3 en la
  localización del transcrito. Hay 2 posibilidades
• i1 contiene información específica de secuencia.
• El splicing en la posición i1 es esencial para la
  localización de oskar mRNA.

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• Utilizando el transgénico osk(i3 in i1) se vio
  que se localizaba correctamente con Y14. Así pues
  el reclutamiento de Y14 es independiente de la
  secuencia del intrón.

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Revisión de los trabajos con RNA híbrido
lacZ-osk3UTR

• Puede que oskar RNA endógeno afecte a los
  resultados. La localización de lacZ-osk3UTR en
  oskA87/Df(3R)pXT103 no es posible porque la
  oogenesis se detiene en sus primeros estadios. Se
  utilizaron
• oskWT? localizacion correcta
• osk?i(1,2,3)? deslocalizado
• osk84? localización correcta

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Conclusiones

• LacZ-osk3UTR necesita una fuente endógena de
  oskar mRNA para su localización en el polo
  posterior del oocito.
• La localización es independiente de la proteína
  Oskar.
• La localización de lacZ-osk3UTR en el polo
  posterior se debe probablemente a que se une a
  los complejos mRNP.
• La región 3UTR es esencial, ya que los
  trancritossin 3UTR no se localizan.

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• Solo la deposición del EJC en la primera unión
  exón-exón es esencial, aunque EJC se une a todas.

Se requiere una señal de EJC y una posición
concreta.
Papel estructural del heterodímero Y14-Mago
nashi, y de eIF4AIII y Barentsz.
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EJC
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Conclusiones

• Que el splicing, y Y14 y Mago nashi sean
  esenciales para su localización, demuestra que
  el splicing y la localización están acopladas por
  la deposición dependiente del splicing del EJC.

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Propuesta de función del EJC

• Especificar la estructura del mRNP según sea su
  localización citoplásmica.
• En humanos la señalización con EJC permite
  reconocer codones de parada prematuros provocando
  la activación de NMD (degradación de mRNA).
• En Drosophila factores de NMD y EJC están
  conservados, pero la terminación prematura no
  depende de EJC ni de la posición del intrón.
  Sugiere un complejo conservado con diferentes
  funciones.

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• No quiere decir que el EJC no este implicado en
  la localización citoplásmica de mRNA en
  vertebrados, ya que se ha detectado Barentsz en
  neuronas del hipocampo.
• Se podrá utilizar para determinar si el
  transporte de otros mRNAs es mediante EJC y para
  determinar la importancia de la conservación del
  EJC.