Diapositive 1

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LE MILIEU DE HUGH ET LEIFSON
Source de C et N
Composition
Source de C, N, minéraux et vitamines
Peptone pancréatique de caséine 2 g Extrait de
levure 1 g Chlorure de sodium 5 g Phosphate
monopotassique 0,3 g Glucose 10 g Bleu de
Bromothymol 0,03 g Agar (gélose) 3 g
ED qsp 1 L
Équilibre ionique
Source de P
Source de C à rajouter
Indicateur de pH Vert pH basique ou neutre, jaune
pH acide
solidification du milieu gélose semi solide
pH 7,2
Milieu aqueux
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Technique d ensemencement
1- Régénérer le tube 20 minutes au bain marie
bouillant
2- Ajouter le volume de solution de glucose
stérile dans le milieu en surfusion à 45C
3- A jouter trois gouttes de suspension
bactérienne et refroidir immédiatement le tube
sous leau froide.
4- Ne pas visser le tube à fond
5- Incuber 24 heures à 37C
lecture
Virage de lindicateur de pH au jaune dans tout
le tube. Le milieu est devenu acide. Il y a eu
production dacides lors de lutilisation du
glucose par les bactéries en présence et en
absence dO2. Les bactéries sont fermentatives
vis-à-vis du glucose.
Virage de lindicateur de pH au jaune dans la
partie supérieure du tube. Le milieu est devenu
acide. Il y a utilisation du glucose par les
bactéries en présence d O2. Les bactéries sont
oxydatives vis-à-vis du glucose.
Le milieu reste tel quil était avant
ensemencement. Il ny a pas de culture. Les
bactéries sont inertes vis-à-vis du glucose
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Le milieu Citrate de Simmons
Composition
Sulfate de magnésium 0,2 g Phosphate
monopotassique 1 g Phosphate bipotassique 1
g Citrate de sodium 2 g NaCl 5 g Bleu de
Bromothymol 0,08 g Agar (gélose) 15 g
ED qsp 1 L
Sources minérales
Seule source de C
Equilibre osmotique
Indicateur de pH Vert pH basique ou neutre, jaune
pH acide
pH 6,8
Ensemencement
Faire une strie centrale avec une suspension en
eau physiologique ou directement à partir dune
colonie Ne pas visser le bouchon à fond Incuber
24 h à 37C
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Milieu de Clark et Lubs
Composition
Peptone trypsique ou polypeptone 5 à 7
g Glucose 5 g Phosphate bipotassique 5
g ED qsp 1 L
Sources minérales
Source de C
Source minérale
pH 7
Ensemencement
Ensemencer avec 5 à 10 gouttes de suspension
bactérienne. Ne pas visser le bouchon à
fond Incuber 24 h à 37C
Test RM
Après incubation, prélever 2 mL du milieu et les
déposer dans un tube à hémolyse. Ajouter 1 à 2
gouttes de rouge de méthyle. Observer.
Test VP
Après incubation, prélever 1 mL du milieu et les
déposer dans un tube à hémolyse. Ajouter 0,5 mL
d?-naphtol et 0,5 mL de soude. Mélanger et
incliner le tube. Faire la lecture après 10 à 15
min de contact.
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Milieu de Kligler Hajna
Composition
Extrait de viande de boeuf 3 g Extrait de
levure 3 g Peptone 20 g Chlorure de
sodium 5 g Citrate ferrique 0,3 g Thiosulfate
de sodium 0,3 g Lactose 10 g Glucose 1
g Rouge de phénol 0,05 g Agar (gélose) 12 g
ED qsp 1 L
Source de C et N
Equilibre osmotique
Mise en évidence de la formation H1 S
Source de soufre, témoin doxydo-rédcution
Source glucidique majoritaire
Source glucidique minoritaire
Indicateur de pH
pH 7,4
Ensemencement
1) Stries serrées sur la pente Öse ou pipette
boutonnée
2) Piqûre centrale dans le culot Fil droit ou
pipette boutonnée
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Milieu mannitol mobilité nitraté
Composition
Sources de C et N
peptone 20 g Nitrate de potassium 2
g Mannitol 2 g Rouge de phénol à 1 4
mL gélose 4 g ED qsp 1 L
Apport de nitrates
Source de C
Indicateur de pH
pH 8
Ensemencement
Piqûre centrale avec le fil droit
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Lecture des milieux
Citrate de Simmons
1ère lecture possible
2nde lecture possible
Le milieu présente une culture, lindicateur de
pH a viré au bleu ? le milieu est devenu
basique. Les bactéries ont utilisé le citrate
comme source de carbone en produisant des
composés alcalinisant le milieu CITRATE
Le milieu ne présente aucune culture. Les
bactéries nutilisent pas le citrate comme source
de carbone CITRATE -
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Clarck et Lubs
2- Test VP
1- Test RM
1ère lecture possible
2nde lecture possible
1ère lecture possible
2nde lecture possible
Le milieu est devenu rouge ? le pH est acide . Il
y a eu formation de composés acides par les
bactéries au cours de la fermentation du
glucose. Les bactéries utilisent la voie des
acides mixtes RM .
Le milieu est devenu jaune ? le pH est basique
. Les bactéries nutilisent pas la voie des
acides mixtes lors de la fermentation du glucose
RM -.
Formation dune coloration rouge en surface . Il
y a formation dacétoïne et de butanediol dans le
milieu lors de la fermentation du glucose. Les
bactéries utilisent la voie du butanediol VP .
Pas de modification du milieu . Les bactéries
nutilisent pas la voie du butanediol lors de la
fermentation du glucose VP -.
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Mannitol mobilité
2- Mobilité
1- Utilisation du mannitol
1ère lecture possible
2nde lecture possible
1ère lecture possible
2nde lecture possible
Le milieu est devenu jaune ? le pH est acide
. Les bactéries fermentent le mannitol et
produisent des acides qui acidifient le milieu
MANNITOL .
Le milieu est resté rouge ? le pH est neutre ou
basique . Les bactéries ne fermentent pas le
mannitol MANNITOL -.
Observation dune culture dans tout le tube. Les
bactéries ont diffusé dans tout le milieu elles
sont MOBILES.
Culture uniquement au niveau de la piqûre
centrale. Les bactéries sont IMMOBILES.
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Kligler Hajna
1- lecture de la production dH2 S
2- lecture de la production de gaz
Précipité noir de sulfure ferrique
Pas de précipité noir
bactéries ! H2S-
Présence de bulles dans la gélose
Pas de bulle dans la gélose
Production dH2S par les bactéries ! H2S
Les bactéries produisent du gaz (H2 ou CO2) au
cours de leur fermentation GAZ
bactéries ! GAZ -
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3- Lecture de lutilisation du lactose
Acidification de tout le milieu lors de la
fermentation des glucides GLUCOSE et LACTOSE
Alcalinisation de la pente, les bactéries ne
fermentent pas le lactose LACTOSE -
Acidification du culot lors de la fermentation du
glucose GLUCOSE
Acidification du milieu en aérobiose lors de
lutilisation des glucides LAC et GLC
oxydatif
Le milieu reste orangé. Les bactéries nutilisent
pas le glucose et le lactose. GLC - et LAC -
Pente jaune
Culot rouge
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Recherche de la ?-galactosidase
2) Ajouter stérilement un disque ONPG
1) Faire une suspension épaisse à partir de
colonies prélevées sur la pente
Elle seffectue sur un tube de Kligler LAC -
3) Incuber à 37C pendant 30 minutes
2) La suspension est colorée en jaune ? présence
de la ?-galactosidase ONPG , mais absence de
la perméase.
1) Le tube reste incolore. ? absence de la
?-galactosidase ONPG -
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Kligler Hajna
1- lecture de la production dH2 S
2- lecture de la production de gaz
Pas de précipité noir
Présence de bulles dans la gélose
Pas de bulle dans la gélose
bactéries ! H2S-
Les bactéries produisent du gaz (H2 ou CO2 a)u
cours de leur fermentation GAZ
bactéries ! GAZ -
Précipité noir de sulfure ferrique
Production dH2S par les bactéries ! H2S
3- Lecture de lutilisation du lactose
Alcalinisation de la pente, les bactéries ne
fermentent pas le lactose LACTOSE -
Tube jaune
Pente jaune
Tube orange
Pente rouge
Culot rouge
Culot jaune
Acidification du milieu en aérobiose lors de
lutilisation des glucides LAC et GLC
oxydatif
GLC - et LAC -
Acidification de tout le milieu lors de la
fermentation des glucides GLUCOSE et LACTOSE
Acidification du culot lors de la fermentation du
glucose GLUCOSE