Title: Apport%20du%20laboratoire%20dans%20le%20diagnostic%20et%20le%20traitement%20des%20infections
1Apport du laboratoire dans le diagnostic et le
traitement des infections
- Le prélèvement.
- Lexamen au laboratoire.
- Les relations entre le laboratoire et le service
demandeur. -
2Le prélèvement conditions générales (1)
- dans les règles de soins et dhygiène
- avant ladministration dantimicrobiens.
- le plus tôt possible dans le processus infectieux
- -au plus près du foyer initial (ou des lésions
secondaires ) - -éventuellement au niveau de la porte
dentrée et sur les voies d excrétion.
3Le prélèvement conditions générales (2)
- quantité la plus importante possible de matériel.
- méthodes différentes selon les micro-organismes
recherchés, les organes à prélever, le type des
lésions, lenjeu du diagnostic.
4Le prélèvement conditions générales (3)
- éviter la contamination des prélèvements
- (bactéries de lenvironnement et bactéries
commensales) - -gt respect des règles dhygiène
- -gt matériel stérile à usage unique.
- -gt dispositifs spéciaux
- -gt décontamination de la surface à prélever
5Le prélèvement conditions de recueil
- dans un récipient
- stérile, à usage unique
- étanche et fermé hermétiquement
- identifié nom et prénom du malade,
- nature et site du
prélèvement. - date et heure du prélèvement.
- introduit dans un sac plastique étanche et fermé
hermétiquement
6Le prélèvement conditions de transport (1)
- idéalement prélèvement effectué au laboratoire.
- si transport de lt 30 mm pour les petits
échantillons ou de lt 2 heures pour les autres
tube sec stérile. - si transport de gt 2 heures
- inoculation dans un flacon dhémoculture
anaérobie et dans un tube sec stérile. - conservation - tube stérile à 4C
- - flacon à 37C (ou t
ambiante) - si transport de gt24 heures milieu de transport
type Portagerm - sauf échantillons respiratoires et LCR
7Le prélèvement conditions de transport (2)
-
- cas spéciaux nécessitant la congélation du
prélèvement recherche de -
- virus enveloppés, -
- Bartonella - contacter le laboratoire avant de prélever
-
8Le prélèvement refus d analyse
- échantillons
- reçus dans des récipients non étanches
- mal conservés
- non étiquetés
- inappropriés aux analyses prescrites
- même type d échantillon quun échantillon reçu
le même jour (sauf hémoculture, LCR ou en cas
d aggravation de la situation clinique).
9Examen au laboratoire
-
- Diagnostic direct mise en évidence de lagent
infectieux - Diagnostic indirect mise en évidence de la
réaction de lorganisme à la multiplication de
lagent infectieux -
- sérologie
-
10Les étapes de l examen bactériologique classique
- ? examen microscopique
- ? culture
- ? tests de sensibilité aux antibiotiques
11L examen microscopique (1)
- effectué directement sur le prélèvement,
- à létat frais et après coloration de Gram (ou
autreex, Z. Neelsen) - résultats le jour même du prélèvement
- détecte la présence de
- - bactéries (si suffisamment
nombreuses) - - polynucléaires neutrophiles
-
12L examen microscopique (2) les bactéries
- flore polymorphe ou monomicrobienne
- cocci ou bacilles, mobiles ou non
- Gram ou Gram -
-
- -gt indications pour le choix des milieux à
ensemencer - -gt base pour interprétation du résultat des
cultures. - -gt indications pour la mise en place du
traitement
13Coloration de Gram cocci à gram positif
14Coloration de Gram bacilles à Gram négatif
15L examen microscopique (3) les polynucléaires
neutrophiles
- la présence de polynucléaires neutrophiles
altérés est en faveur dune infection
bactérienne. -
- cas des liquides de ponction recherche par
coloration cytologique (May Grunwald Giemsa)
16La culture (1)
- sur différents milieux solides , liquides,
enrichis , sélectifs , en aérobiose et parfois en
anaérobiose. - colonies en milieu solide et trouble en milieu
liquide - isolement impératif pour distinguer les
différentes espèces présentes. - certaines espèces requièrent des milieux et des
conditions de - mise en culture spéciaux (mycobactéries,
Rickettsies, Chlamydia).
17La culture (2)
- résultats obtenus habituellement en 24 heures
- ( mais parfois plusieurs jours ou semaines
selon les bactéries). - -gt permet de faire
- la détection des bactéries qui nont pas été
observées à lexamen microscopique. - lappréciation quantitative des bactéries
présentes. - l identification des différentes espèces et si
nécessaire lantibiogramme.
18L identification de la culture (1)
- effectuée par étude des caractères culturaux
et biochimiques - avec des trousses d identification
commercialisées (gammes API) -
- habituellement en quelques heures ( 24 heures
ou moins )
19L identification de la culture (2) cas des
bactéries à croissance lente et/ou difficile
-
- -gt étude des caractères génotypiques
- hybridation avec des sondes spécifiques
- en utilisant des trousses commercialisées (ex
sonde pour mycobactéries), - résultats en quelques heures .
20Test de sensibilité aux antibiotiques
- effectué par la technique de lantibiogramme
- résultats en 24 h.
- -gt aide à la mise en place du traitement
spécifique - -indispensable en cas
déchec du traitement ou de rechute. - - utile pour les espèces
concernées par la résistance acquise - résistance naturelle partagée par toutes les
souches d une même espèce. - résistance acquise concerne seulement
certaines souches de l espèce.
21Techniques de détection rapide
- 1. recherche d antigènes solubles.
- 2. amplification génique.
22Recherche d antigènes solubles
- dans les urines, le LCR .
- en utilisant des anticorps connus, spécifiques de
la bactérie recherchée - résultats rapides (1 à 2 heures)
- pour
- des infections à bactéries de croissance
difficile (légionelle,pneumocoque) - des infections décapitées (méningite)
- limites manque de sensibilité
23Amplification génique
- principe multiplier le génome (une fraction
spécifique) de la bactérie sans multiplier la
bactérie - diverses techniques dont la PCR
- intérêt rapidité (1 journée) et sensibilité
(sauf BK) - pour la mise en évidence directement dans le
prélèvement de bactéries à croissance lente ou
/et difficile (et de nombreux virus)
- quand des trousses sont disponibles dans la
commerce -
24Relations entre le laboratoire et le service
demandeur
- le service clinique doit fournir les
renseignements utiles à la qualité de l analyse
éléments cliniques, traitements pouvant
interférer dans l analyse, contexte
épidémiologique -
- linterprétation des résultats et lélaboration
de la stratégie thérapeutique doivent être faites
après confrontation des résultats avec les
données cliniques. -
25La sérologie (1)
- mise en évidence danticorps dans le sang
-
- par formation de complexes antigène-anticorps,
en utilisant des antigènes spécifiques du
micro-organisme recherché - diverses techniques de révélation des
complexesagglutination, fluorescence -
26La sérologie (2)
- sang prélevé sur tube sec stérile
- résultats en 24-48 heures
- 2 prélèvements pour mettre en évidence la montée
du taux des anticorps un le plus tôt possible et
lautre environ 15 jours plus tard - en bactériologie réservé aux cas de
diagnostic direct difficile (ex brucellose,
légionellose, mycoplasmes, chlamydia) - très utilisé en virologie et parasitologie
27- Bactéries et antibiotiques
28Structure des bactéries
- Bactérie Cellule procaryote
- Paroi
- Membrane cytoplasmique
- Cytoplasme
- Chromosome circulaire
29Les antibiotiques
- Cible les différentes voies métaboliques des
bactéries
30(No Transcript)
31ANTIBIOTIQUES INTERVENANT DANS LA SYNTHESE DE LA
PAROI
- ?-LACTAMINES
- GLYCOPEPTIDES
- FOSFOMYCINE
- BACITRACINE
32Cible daction des béta-lactamines
33(No Transcript)
34ANTIBIOTIQUES ACTIFS SUR LES MEMBRANES
35ANTIBIOTIQUES INHIBANT LA SYNTHESE OU
L'EXPRESSION DE LADN
- QUINOLONES
- RIFAMPICINE
- INHIBITEURS DE LA SYNTHÈSE DES FOLATES
SULFAMIDES ET TRIMETHOPRIME - 5-NITRO-IMIDAZOLÉS
- NITROFURANES
36ANTIBIOTIQUES INHIBANT LA SYNTHESE DES PROTEINES
- MACROLIDES ET APPARENTES
- TETRACYCLINES
- AMINOSIDES
- CHLORAMPHENICOL
- ACIDE FUSIDIQUE
37Synthèse des protéines
38Synthèse des protéines
39Synthèse des protéines
40Les champignons et les anti fongiques
41Caractéristiques des champignons
- Cellules qui produisent de lénergie (glycogène),
se reproduisent (spores) - Paroi rigide (polysaccharides)
- Membrane cytoplasmique (ergostérol)
- Noyau avec membrane nucléaire
- Cytoplasme avec des mitochondries
42(No Transcript)
43(No Transcript)
44(No Transcript)
45(No Transcript)
46(No Transcript)
47(No Transcript)
48(No Transcript)
49(No Transcript)
50Les virus
51Structure virale
- Un acide nucléique , ADN ou ARN
- Un complexe protéique protecteur, la capside
- Une enveloppe (membrane lipidique) facultative
52La multiplication virale
- Virus être très simple incapable de se
multiplier seul - Pas de matières premières
- Pas de sources dénergie
- Pas denzymes
- Seulement linformation génétique
- ? pour la réplication utilisation de la
machinerie de la cellule infectée
53 LA MULTIPLICATION DU VIRUS DANS LA CELLULE CIBLE
- A Attachement
- B Pénétration
- C Décapsidation
- D Réplication
- E Synthèse des protéines virales (par
traduction des ARNm viraux) - F Assemblage
- G Libération des virions néoformés par
bourgeonnement ou fusion-lyse
54Les antiviraux
- Ne visent pas les virus eux-mêmes qui sont
métaboliquement inertes - Bloquent le cycle de multiplication des virus, à
différentes étapes
55 PRINCIPAUX ANTIVIRAUX
- PÉNÉTRATION ET DÉCAPSIDATION
- T-20 ou pentafuside FUZEON
- ? Produit actif sur le virus de
limmunodéficience humaine inhibiteur de fusion - Amantadine (MANTADIX)
- Chlorhydrate d'amino-L-adamantane
- Action sur les virux grippaux (Influenzavirus A
et B)
56 RÉPLICATION incorporation au cours de la
synthèse de lacide nucléique viral
- 1. Inhibiteurs par compétition avec un nucléotide
naturel ou par terminaison de chaîne - Analogues nucléosidiques (analogues de base ou
de sucre de lacide nucléique) - ex - aciclovir ou ZOVIRAX (herpes virus)
- - ganciclovir ou CYMEVAN
(cytomégalovirus) - - zidovudine (AZT) ou RETROVIR (Hiv)
- -lamivudine (3TC) ou EPIVIR,.
-
572. Inhibiteurs non nucléosidiques denzyme virale
- Névirapine (VIRAMUNE)
- Efavirenz ou SUSTIVA,
- ? Action sur le VIH
583. Incorporation directe à lADN viral
- Acide phosphonoformique (FOSCAVIR)
- PFA foscarnet
? Action sur les virus herpes simplex,
varicelle-zona, cytomégalovirus
59- MATURATION
- inhibiteurs de protéases
- Nelfinavir ou VIRACEPT
- Saquinavir ou INVIRASE?
- ? Action sur les virus de limmunodéficience
humaine
60- LIBÉRATION
- Inhibiteurs de la neuraminidase
- ? 4- guanidino-Neu5Ac2en Zanamivir ou RELENZA
- ? Oseltamivir ou TAMIFLU
- ? Action sur les virus grippaux (Influenzavirus A
et B)
61Schéma de multiplication du VIH et cibles
thérapeutiques
62Les interférons
- Dégradation des ARN messagers par activation
dune ribonucléase - ? arrêt de la production des protéines virales