B - La microscopie

1
B - La microscopie électronique

• Améliorations récentes
• congélation
• 3D
• Conditions de qualité
• le microscope
• résolution théorique 0,2 nm
• résolution biologique 2 nm

2
Le microscope électronique

• Résolution
• Résolution 100 résolution MO

3
Fig 9-21
0,2 nm
Feuille d or en microscopie électronique
4
Fig 9-22
5
The Transmission Electron Microscope (TEM)
6
Siemens 1964
7
La microscopie électronique

• Conditions de qualité
• le microscope résolution 2 nm
• léchantillon fixation, inclusion, coupe,
  étalement, coloration. Cryo-ultrotomie

8
Fig 9-23
9
Fig 9-24
10
Fig 9-25
11
Immuno enzymo ME
12
Fig 9-26
13
Fig 9-26
Localisation de protéines en ME
14
La microscopie électronique

• Conditions de qualité
• le microscope résolution 2 nm
• l échantillon fixation, inclusion,coupe,
  étalement, coloration. Congélation
• Le microscope électronique à balayage

15
Bozzola,JJ2001EncyclpediaNature(fig1)
16
Block diagram of a typical SEM
SEM
17
(No Transcript)
18
MEB
ME à balayage
19
Bozzola,JJ2001EncyclpediaNature(fig3)
20
Bozzola,JJ2001EncyclpediaNature(fig4)
21
Fig 9-27
22
Fig 9-28
23
Fig 9-29
24
Fig 9-30
25
Fig 9-31

• Congélation rapide suivie de microscopie
  électronique à balayage

26
MEB Une puce
Une puce
27
MEBBozzola,JJ2001EncyclpediaNature(fig4)
28
MEB
29
MEB
Model - 438VPSpecimen Insect
(uncoated)Detector VPSEMode Variable
PressurePressure 186 PaOriginal Magnification
437 XAccelerating Voltage 25 kV
30
MEB
Model - 438VPSpecimen Insect LegDetector
VPSEMode Variable PressurePressure 104
PaOriginal Magnification 100 XAccelerating
Voltage 30 kV
31
MEB
Model - 435VPSpecimen Paper with size 4 laser
printDetector QBSDMode Variable
PressurePressure 1.87e-001 TorrOriginal
Magnification 1.07 kXAccelerating Voltage 25
kV
32
La microscopie électronique

• Conditions de qualité
• le microscope résolution 2 nm
• l échantillon fixation, inclusion,coupe,
  étalement, coloration. Congélation
• Le microscope électronique à balayage
• Le Microscope Électronique à Haut Voltage (HVEM)

33
La microscopie électronique

• Conditions de qualité
• le microscope résolution 2 nm
• l échantillon fixation, inclusion,coupe,
  étalement, coloration. Congélation
• Le microscope électronique à balayage
• Le Microscope Électronique à Haut Voltage (HVEM)
• Ombrage
• petits objets

34
(No Transcript)
35
La microscopie électronique

• Conditions de qualité
• le microscope résolution 2 nm
• l échantillon fixation, inclusion,coupe,
  étalement, coloration. Congélation
• Le microscope électronique à balayage
• Le Microscope Électronique à Haut Voltage (HVEM)
• Ombrage
• petits objets
• gros objets (réplique)

36
Fig 9-32
37
La microscopie électronique

• Conditions de qualité
• le microscope résolution 2 nm
• l échantillon fixation, inclusion,coupe,
  étalement, coloration. Congélation
• Le microscope électronique à balayage
• Le Microscope Électronique à Haut Voltage (HVEM)
• Ombrage
• petits objets
• gros objets (réplique)
• Cryofracture ( fracture congélation)

38
Fig 9-33
39
La microscopie électronique

• Conditions de qualité
• le microscope résolution 2 nm
• l échantillon fixation, inclusion,coupe,
  étalement, coloration. Congélation
• Le microscope électronique à balayage
• Le Microscope Électronique à Haut Voltage (HVEM)
• Ombrage
• petits objets
• gros objets (réplique)
• Cryofracture ( fracture congélation)
• Cryodécapage

40
Cryofracture
41
Cryofracture décapage
42
Cryofracture décapage
43
Fig 9-34
44
Elektronenmikroskopische Aufnahme der geschichtet
gebauten Zellwand eines Gameten. Das Präparat
wurde nach einem von J. E. HEUSER erarbeiteten
45
Orci,L2002(fig3).jpg

• Bordure en brosse d'une cellule épithéliale de
  tubule proximal de rein

46
La microscopie électronique

• Conditions de qualité
• le microscope résolution 2 nm
• l échantillon fixation, inclusion,coupe,
  étalement, coloration. Congélation
• Le microscope électronique à balayage
• Le Microscope Électronique à Haut Voltage (HVEM)
• Ombrage
• petits objets
• gros objets (réplique)
• Cryofracture ( fracture congélation)
• Cryodécapage
• Coloration négative

47
Fig 9-35
Filaments dactine en coloration négative
48
Fig 9-36 (AB)
49
Fig 9-36 (C)
50
Fig 9-37

• Structure 3-D de la sous-unité 70 S du ribosome
  de E coli en TEM (Tomographie Electron Microscopy)

51
Fig 9-37
52
La microscopie électronique

• Conditions de qualité
• le microscope résolution 2 nm
• l échantillon fixation, inclusion,coupe,
  étalement, coloration. Congélation
• Le microscope électronique à balayage
• Le Microscope Électronique à Haut Voltage (HVEM)
• Ombrage
• petits objets
• gros objets (réplique)
• Cryofracture ( fracture congélation)
• Cryodécapage
• Coloration négative
• Cryo microscopie électronique (cryo ultrotomie)

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Informatique en microscopie électronique
Orci,L2002p133

• COP-I coated vesicles (en rouge artificiellement)
  budding from the golgi apparatus