Presentacin de PowerPoint

1
PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CHILE FACULTAD
DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DOCTORADO EN CIENCIAS
BIOLÓGICAS MENCIÓN DE GENÉTICA MOLECULAR Y
MICROBIOLOGÍA
Búsqueda y caracterización de determinantes de
lisogenia en la interacción funcional de los
bacteriófagos Gifsy-1 y Gifsy-2 de Salmonella
typhimurium
Jaime Tobar R.
2
Bacteriófagos
CJW1 Mycobacterium sp.
T4 Escherichia coli
LP65 Lactobacillus sp.
Brüssow H., y cols. Cell, 2002
3
Bacteriófagos Temperados ?
4
Bacteriófagos y Factores de Virulencia
Boyd E., y cols. Trends in Microbiology, 2001
5
Interacción Bacteriófago-Bacteriófago
Vibrio cholerae CTX? y VPI?
Taylor R. Nature, 1999
6
Interacción Bacteriófago-Bacteriófago
Escherichia coli P4 y P2
Lindqvist B. y cols. Microbiol. Rev., 1993
7
Interacción Bacteriófago-Bacteriófago
Escherichia coli P4 y P2
Lindqvist B. y cols. Microbiol. Rev., 1993
8
2 profagos temperados Gifsy-1 y Gifsy-2
Figueroa-Bossi N. y cols. Mol. Microbiol., 1997
9
Características de Gifsy-1 y Gifsy-2
Receptor Común OmpC
Ho T. y Slauch J. J. Bacteriol., 2001
10
Características de Gifsy-1 y Gifsy-2
Receptor Común OmpC
Ho T. y Slauch J. J. Bacteriol., 2001
11
Características de Gifsy-1 y Gifsy-2
Indicios de rol en Virulencia
Identificación de estos factores
Figueroa-Bossi N. Y Bossi L. Molecular
Microbiol., 1999
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Factores de Virulencia Gifsy-1
Sólo un factor caracterizado, gipA (411 aa) Su
deleción disminuye la sobrevivencia en las placas
de Peyer
Stanley T., y cols. J. Bacteriol., 2000
13
Otros factores de Virulencia en Gifsy-2
GtgE SodCI SseI MsgA
Worley M., y cols. Mol. Microbiol., 2000 Ho J., y
cols. J. Bacteriol., 2002
14
Interacción Gifsy-1 con Gifsy-2
Superóxido Dismutasa (sodC)
De Groote M.A. y cols. PNAS, 1997
15
Interacción Gifsy-1 con Gifsy-2
Inducción Profagos
Niveles similares en Gifsy-2 ?Gifsy-1
Figueroa-Bossi N. Y Bossi L. Molecular
Microbiol., 1999
16
Interacción Gifsy-1 con Gifsy-2
La proteína SodC da cuenta importante de la
contribución a la patogenicidad de Salmonella por
parte de Gifsy-2, pero existen factores
importantes para la virulencia codificados en
Gifsy-1 que son de alguna manera activados o
potenciados por la presencia de esta proteína.
Figueroa-Bossi N. y Bossi L. Mol. Microbiol., 1999
17
Homoinmunidad
18
Heteroinmunidad
19
Interacción Gifsy-1 con Gifsy-2
Figueroa-Bossi N. y Bossi L. Mol. Microbiol., 1999
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Determinantes en lisogenia
Gifsy-1
Gifsy-2


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Determinantes en lisogenia
Secuencias Putativas de Gifsy-1 y Gifsy-2
Homología de ORFs putativos en regulación
Gifsy-2 Proteína represora de la inhibición de la
división celular Proteína P Bacteriófago ?
(replicación) Gifsy-1 Represor cI
22
Represor cI
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Determinantes en lisogenia
Secuencias Putativas de Gifsy-1 y Gifsy-2
El Represor cI NO SERÍA el factor buscado
Forma de represión excluyente (Unidireccional)
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Hipótesis
Existen determinantes codificados en Gifsy-1 que
disminuyen solamente la actividad lítica de
Gifsy-2
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Estrategia Experimental
Generación de Mutantes de Gifsy-1 en los ORFs aún
no identificados, a nivel genómico en entorno
?Gifsy-2
ORFA
ORFB
ORFC
Infección con Gifsy-2 en S. typhimurium ?Gifsy-2
Gifsy-1, a cada mutante

Gifsy-2
ORFB-
H2O2
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Estrategia Experimental
Identificar placas con mayor actividad lítica de
Gifsy-2
Gifsy-2 en Gifsy-1 ORFB-
Gifsy-2 en WT
Complementación Funcional
Gifsy-2 en Gifsy-1 ORFB-, TnXORFB-
Gifsy-2 en WT
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Gifsy-1 y Gifsy-2 en Salmonella Modelo
28
(No Transcript)