Express

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• Expressão Recombinante em Células Eucarióticas
• 1-Introdução
• 2-Sistemas de expressão em leveduras
• Edmar Vaz de Andrade

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1-introduçao
Dificuldades em sistemas de expressão em
Escherichia coli
1-Processamento pós-traducional da proteína
(glicosilação) 2-Enovelamento da proteína na
conformação nativa (corpos de inclusão) 3-Degrada
ção da proteína recombinante pela E. coli.
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2-Sistemas de expressão leveduras
Pichia pastoris e Saccharomyces cerevisae Fácil
manipulação Cultivo relativamente
rápido preservam as características favoráveis
das bactérias Maior proximidade filogenética
de animais do que as bactérias processamento
pós-traducional comparável ao dos eucariotos
pluricelulares
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2-Sistemas de expressão leveduras
Padrão de Glicosilação
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2-Sistemas de expressão leveduras
Pichia pastoris Alto rendimento de proteína
recombinante Glicosilação comparável à realizada
em células animais Maior eficiência de secreção
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2-Sistemas de expressão leveduras
Vetor de Expressão em Pichia pastoris
INVITROGEN
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2-Sistemas de expressão leveduras
Transformação de leveduras P. pastoris
HIS4- Recombinação Homóloga
INVITROGEN
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2-Sistemas de expressão leveduras
Vetor de Expressão em Pichia pastoris
Marca auxotrófica (nutricional) para biossíntese
de histidina Cultivo em meio de cultura sem
histidina Clones não transformados são inviáveis
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2-Sistemas de expressão leveduras
Vetor de Expressão em Pichia pastoris
Indução da síntese de proteína recombinante com
adição de metanol como fonte de carbono Para
inibir o promotor cultivo na presença de
glicerol como fonte de carbono Obtenção da
proteína solúvel no sobrenadante