APC

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APC Choc Septique

• Contributions respectives des activités
  anticoagulante,
• anti-inflammatoire et cytoprotectrice de lAPC
• à son efficacité dans le choc septique.

E.J. Kerschen et al. (Milwaukee, Etats-Unis)
Résumé 1 J.S. Bae et al. (Saint Louis,
Etats-Unis) Résumé 62 X.V. Yang et al. (La Jolla,
Etats-Unis) Résumé 65 ASH 2006.
Protéine C activée.
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Contexte

• La protéine C activée (APC  Activated Protein C)
  
• exerce à la fois des activités anticoagulante,
• anti-inflammatoire et cytoprotectrice.
• Les contributions respectives de ces différentes
  activités à lefficacité globale de lAPC pour
  réduire la mortalité dans le choc septique sont
  encore inconnues.
• Trois approches complémentaires concourent à
  léclaircissement de cette question.

E.J. Kerschen et al. (Milwaukee, Etats-Unis)
Résumé 1 J.S. Bae et al. (Saint Louis,
Etats-Unis) Résumé 62 X.V. Yang et al. (La Jolla,
Etats-Unis) Résumé 65 ASH 2006.
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E.J. Kerschen et al. Principes
APC recombinante murine (mrAPC) 0,04 à 0,2
mg/kg de poids corporel en i.v.
Concomitamment, ou jusquà 3 heures après
linjection létale
Modèle  Escherichia coli  Injection i.p. dune
DL50 de lipopolysaccharide 1
Critère de jugement Mortalité ( des animaux)
Choc septique chez la souris
Concomitamment
Modèle  Staphylococcus aureus  Injection i.p.
dune DL50 de bactérie entière

• Lipopolysaccharide (LPS) endotoxine
  dEscherichia coli
• i.v. intraveineux
• i.p. intrapéritonéal
• DL50 dose tuant la moitié des animaux

E.J. Kerschen et al. (Milwaukee, Etats-Unis)
Résumé 1 ASH 2006.
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E.J. Kerschen et al. Résultats
Une mortalité passée de 50 à 0-10 grâce à
laddition de protéine C activée ou de son
mutant non anticoagulant.
Mutants 3- ou 5-A Mutation de la sérine 330
du site catalytique en alanine (S360A)
E.J. Kerschen et al. (Milwaukee, Etats-Unis)
Résumé 1 ASH 2006.
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E.J. Kerschen et al. Conclusions

• La réduction de mortalité dans le choc septique
  est due à laction enzymatique de lAPC, médiée
  non par un effet anticoagulant
• mais par la fixation à lEPCR permettant la
  protéolyse
• de PAR-1 et leffet cytoprotecteur.
• Les actions cellulaires de lAPC sont
  bénéfiques
• pour lutter contre les étapes précoces
• du choc septique bactérien.
• Les variants à très faibles activités
  anticoagulantes
• devraient permettre dutiliser des doses plus
  élevées dAPC pour le traitement des sepsis, sans
  les effets secondaires néfastes de lactivé
  anticoagulante.
• Cependant, dans le modèle à Gram, laction
  anticoagulante de lAPC peut contrebalancer
• ses actions protectrices.

E.J. Kerschen et al. (Milwaukee, Etats-Unis)
Résumé 1 ASH 2006.
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J.S. Bae et al. Principes
Introduction dun pont disulfure
Stabilisation de la boucle 70-80 de la chaîne
lourde
Inhibition de la fixation du Ca
Protéine C  sauvage 
Mutant 60 à 80 fois mieux activé par la thrombine
J.S. Bae et al. (Saint Louis, Etats-Unis) Résumé
62 ASH 2006.
La fixation du Ca est nécessaire à
linteraction de la PCA avec FVa et FVIIIa.
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X.V. Yang et al. Principes
Modifications les acides aminés chargés
positivement présents dans la partie supérieure
de la molécule dAPC
Mutants différents quant à leurs actions
biologiques et leur capacité de fixation sur le
récepteur APC
Protéine C  sauvage 
X.V. Yang et al. (La Jolla, Etats-Unis) Résumé
65 ASH 2006.
Actions catalytique, anticoagulante,
anti-apoptotique et anti-inflammatoire.
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Au total
Lensemble de ces études confirme limportance du
design moléculaire pour améliorer le rapport
efficacité/sécurité des biothérapies. Lun des
points majeurs reste limmunogénicité potentielle
de ces molécules modifiées. Question
relativement théorique dans le traitement aigu du
choc septique, limmunogénicité est et restera
une problématique fondamentale dans le traitement
dune maladie chronique.
E.J. Kerschen et al. (Milwaukee, Etats-Unis)
Résumé 1 J.S. Bae et al. (Saint Louis,
Etats-Unis) Résumé 62 X.V. Yang et al. (La Jolla,
Etats-Unis) Résumé 65 ASH 2006.
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A propos de design
Cette zone, proche de la boucle 70 80 fixant le
Ca, est impliquée dans la fixation des facteurs
V et VIII. Les mutants de la boucle 70 80 ou
ceux dont ces acides aminés chargés positivement
sont transformés en alanine (non chargée) sont
encore capables de cliver le PAR-1, mais
incapables de transformer les facteurs Va ou
VIIIa en facteurs Vi ou VIIIi.
Arginines 229 et 230
Lysines 191 à 193
Chaîne légère (ombrée)
Protéine C activée
Daprès Chen J, Anderson JB, DeWeese-Scott C,
Fedorova ND et al. MMDB  Entrezs 3D-structure
database. Nucleic Acids Res 2003  31  474-7.
PAR-1 son clivage après fixation de lAPC sur
son récepteur endothélial (EPCR) est à lorigine
de leffet cytoprotecteur.