Microscopie Photonique

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Microscopie Photonique
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I- Microscope Simplifié
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II- Ultramicroscopie en fond noir
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Fond noir l'objet qui apparaît grâce à la
lumière qu'il diffuse. Il y a un fort contraste
et les images sont spectaculaires mais il y a pas
beaucoup de détails.
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Hybridation in situ, révélée par une émulsion
photographique, où l'on ne peut compter les
grains. Hybridation effectuée à l'aide d'un
oligonucléotide complémentaire de l'ARN messager
codant pour la tyrosine hydroxylase dans l'aire
tegmentale ventrale. A-Image en fond clair,
B-Image en fond noir (ce n'est pas une inversion
de l'image en fond clair).
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III- Ultramicroscopie par fluorescence
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IV- Ultramicroscopie à contraste de phase
(inventé par Zernicke en 1932)
Soit un objet possédant une variation d'épaisseur
ou d'indice un phénomène de diffusion apparaît.
Cette différence ne sera pas visible en
microscopie classique. Seule l'interférence
permet de détecter sous forme de variation
d'intensité une variation d'épaisseur ou
d'indice. Si on met en F une petite lame
d'épaisseur et d'indice connus de manière à ce
qu'il y ait une différence de phase entre les
rayons passés par la lame et ceux passés à côté.
L'intensité en B' ne change pas, mais celle en
A', du fait de l'interférence, change.
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Contraste de phase
Contraste de phase positif Un objet plus
réfringent que le milieu donne une image sombre
sur fond gris. C'est le contraste de phase
standard. Bonne mise en valeur des flagelles,
halo autour des cellules
Contraste de phase négatif Un objet plus
réfringent que le milieu apparaît en blanc sur
fond gris. Lisibilité moins bonne.
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V- Ultramicroscopie polarisante
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Ti6242 observation en lumière polarisée Structure
lamellaire ab
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Ta6V attaque colorante Structure en phase b
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Alliage d'aluminium (lumière polarisée après
oxydation anodique au réactif de
Barker) Structure en cours de recristallisation
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Acier inox (observation en lumière polarisée
filtre Nomarski) Structure maclée
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VI- Ultramicroscopie interférentielle (développée
par plusieurs auteurs dont Nomarski en 1952)
Elle a pour but de transformer une différence de
phase en différence d'intensité. On fait
interférer deux ondes (une issue de l'objet et
une de référence (plane) )
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Contraste interférentiel Image sans halo, avec
une impression de relief Cette technique est
vraiment supérieure mais le matériel en est
beaucoup plus coûteux.
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Le contraste interférentiel permet d'exploiter
les objectifs les plus forts. (100x) Il est
possible également de colorer le fond avec une
couleur d'interférence (ici bleu)
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Fond noir
Contraste de phase gt 0
Contraste de phase lt 0
Microscopie interférentielle
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(No Transcript)
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VII- Ultramicroscopie confocale
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