DNS-alap

1
DNS-alapú immunterápiák

• Garaczi Edina

2014. október 16.
2
Definíció DNS vakcinák

• Olyan DNS-plazmid tartalmú vakcinák, amelyek in
  vivo alkalmazásuk során a kódolt proteint
  expresszálják.

3
DNS vakcinák humán klinikai vizsgálatokban

• Infekciók
• Hepatitis B, C vírus
• HIV
• Influenza
• Malária
• HPV
• HSV
• Allergiák
• Pollen (Japán cédrus)

• Tumorok
• B-sejtes lymphoma
• Emlo
• Prostata
• Melanoma
• Tüdo
• Máj, Vese
• Autoimmun betegségek
• IDDM

4
Immunválasz exogén antigének, proteinek
Humorális immunválasz
CD4
Th1 Th2 Th3
5
Immunválasz endogén antigének, DNS
Sejtes Immunválasz sejtlízis
6
CD8 T-sejt mediált sejtlízis
Ther Adv Vaccines, 2014. 2(5) 137148
7
DNS vakcinák celluláris és humorális
immunválaszt is kiváltanak
Liu és mtsai. Immunological Reviews, 2011.
8
HCV fertozés CHRONVAC-C?
Weiland és mtsai. Mol Ther, 2013
9
Prostata tumor PROSTVAC-VF?(PSA-TRICOM, fázis
II vizsgálat)
KaplanMeier curve of overall survival
Gulley és mtsai. Cancer Immunol Res, 2013
10
Miért van szükség az allergia vakcinák
fejlesztésére?

• Célkituzések
• Biztonság fokozása mellékhatások csökkentése
  (darázs-, méh- venom )
• Alkalmazás módja injekció
• Hosszú ideig tartó kezelés 3-5 év
• Sokszor ismételt kezelések 1-4-8 hetente
• Hatékonyság fokozása ételallergia

11
Allergén vakcinák felosztása hatóanyag alapján

• Allergén extractumok tradícionális tisztított
  fehérjék (jelenleg elérheto ASIT)
• Rekombináns peptidek molekuláris-módszerekkel
  eloállított peptid vakcinák (klinikai
  vizsgálatokban)
• DNS vakcinák DNS plazmidot tartalmaznak (
  klinikai vizsgálatokban)

12
ASIT allergén extractumok
JACI 2007 119881-91
13
Rekombináns peptid vakcinák
14
DNS-vakcinák allergiás állatmodellben (OVA-
modell)

• OVA- plazmid DNS

• OVA protein Alumínium hidroxid

• Th1 immunválasz
• IFN?
• IgG2a ?

• Th2 immunválasz ?
• IL4?
• IL5?
• IgE és IgG1 ?

Raz és mtsai, PNAS, 1996
15
Bakteriális DNS plazmid(pC-OVA)
16
DNS plazmid eloállítása, sokszorosítása

• Eloállítás
• gyors
• olcsó
• DNS
• stabil, nem szennyezett

17
Állatkísérletes modell
8-10-hetes BALB/c egér

• Allergén Ovalbumin protein
• Szenzitizálás ip. OVA-Alum inj.
• Provokáció in. OVA oldat
• Nazális tünetek meghatározása 10 percig számolva
• tüsszögés
• orrvakaró mozgások összege

18
Preventív kezelési protokoll
Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013
19
Nazális tünetek
Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013
20
OVA-specific IgE
Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013
21
Citokinek vizsgálata (Th1, Th2)
Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013
22
Terápiás kezelési protokoll
23
Allergia vakcinák jellemzoi

• DNS vakcinák
• (állatmodellek)

• Allergén extraktumok
• (ASIT)

• Eloállítás gyors, olcsó
• DNS plazmid stabil, teljes allergén szekvencia
• Biztonságos
• Immunogén sejtes és humorális immunválasz
• Néhány kezelés, tartós eredmény

• drága, hosszadalmas
• instabil, szennyezett fehérje
• anaphylaxia veszély!!
• Antitest válasz IgE, IgG4
• 3-5 év alkalmazás, sokszor ismételt kezelések

24
CryJ2-DNA-LAMP plazmid(fázis 1 klinikai
vizsgálat)

• Japán cédrus allergénjét (Cry J2) kódoló DNS
  vakcina
• Klinikai vizsgálat 2012 okt- 2013 jún. Honolulu
• 18-63 év közötti allergiás no és férfibeteg,
  valamint nem allergiás önkéntes
• im. injekció 2 hetente ismételve (összesen 4
  injekció)

Kezelési csoportok Bevonási kritérium Dózis
1. nem-allergiás 4mg/ inj.
2. allergiás betegek 2mg/ inj.
3. allergiás betegek 4mg/ inj.
Immunomic Therapeutics Inc. NCT01966224
25
Eredmények CryJ2-DNA-LAMP
Immunomic Therapeutics Inc. NCT01966224
26
További fejlesztési lehetoségek

• Immunstimuláló szekvenciák alkalmazása (DNS
  szekvenciák CpG motívumok)
• Adjuvánsok alkalmazása természetes immunitás
  fokozása
• Új beviteli módok a betegek számára
  kényelmesebb, elfogadhatóbb (topicalis, epicutan)
• mRNS vakcinák fejlesztése