Formation des v

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Formation des vétérinaires sanitaires à la lutte
contre linfluenza aviaire hautement pathogène
Version du 31 janvier 2006
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Plan

• Épidémiologie Rôle de lavifaune
• Critères dalerte signes cliniques et
  diagnostic différentiel
• Moyens de diagnostic expérimental
• Biosécurité

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Historique

• 1959 poulet H5N1, Écosse
• 1963 dinde H7N3, Angleterre, 29 000
• 1966 dinde H5N9, Ontario, 8 100
• 1976 poulet canards H7N7, Victoria 42 000 et
  16 000
• 1979 poulet, dinde H7N7, Angleterre,
• 1983 poulet, dinde H5N2, Pennsylvanie, 17
  millions (6millions US )
• 1985 poulet H7N7, Victoria, gt200 000
• 1991 dinde H5N1, Angleterre, 8000 dindes
• 1992 poulet canards H7N312 700 5 700
• 1994-2003 poulet H5N2, Mexique un milliard
• 1995-2003 poulet H7N3, Queensland 22 000
  Pakistan 3,2 millions
• 1997 poulet H7N4, NGS, 170 000
• 1997 poulet H5N1 Hong Kong 1,4 millions 18 cas
  humains (6 ?)
• 1997 poulet et nbx autres espèces H5N2, Italie
• 1999 dinde, H7N1 Italie, 4 millions 6
  millions de poulets
• 2002 poulet H7N3
• 2003 poulet H7N7 Hollande, 30 millions (/100),
  80 cas humains (1 ?)
• 2003-2005 poulet H5N1, Sud Est Asiatique, gt120
  millions, 114 cas humains
• 2004 poulet H7N3 Colombie britannique, gt 19
  millions

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• SIX RAISONS DE SINQUIETER
• Augmentation des foyers ( tous sous-types )
• Mortalité avifaune sauvage ( H5N1 asiatique )
• Contamination despèces mammalienne
• Tigres
• Risque économique
• (baisse de 20 de la consommation
• risque de blocage des exportations )
• Risque zoonotique
• Zoonose établie mais à incidence faible
• Stade 3 de lalerte de lOMS
• Hypothèse pandémie

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Cycle épidémiologique
IAFP
IAHP
Réservoir
Cible
Souches faiblement pathogènes  FP 
Risque de sélection souches pathogènes
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Sources et transmission

• Voies dexcrétion
• Respiratoire
• Digestive
• Sources Voies de contamination
• Fientes (matières contaminées)
• Eaux
• Sang et tissus
• dans le cas dinfection HP
• Transmission
• Principalement fécale
• Contagion directe/ indirecte

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Transmission intercontinentale Couloirs de
migration
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Transmission intercontinentale Rôle du
 transsibérien  ?
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Exemples doiseaux provenant de la zone infectée
(S.O. Sibérie)
pilet
souchet
fuligule milouin
sarcelle hiver
sarcelle dété
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La  cocotte  africainefermenteur ou
stérilisateur ?
Nature, 437 (2005)
FAO/ EMPRES (Avibulletin 36, 15 nov. 2005)
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4 Voies migratoires traversent la France
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Espèces  à risque 
colvert
siffleur
s. été
f.milouin
c.morillon
vanneau
c. varié
m. rieuse
g. cendré
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Risque épizootie, anadémie, épidémie
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Critères dalerteSignes cliniquesDiagnostic
différentielINFLUENZA AVIAIRE HAUTEMENT
PATHOGENEI.A.H.P
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MOTIFS DE CONSULTATION

• Mortalités brutales et en progression
• Baisse brutale et importante des consommations
• Signes respiratoires marqués
• Signes nerveux
• Arrêt ( ou baisse ) de ponte

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QUESTIONNAIRE CONSULTATION

• Espèces présentes et nombre
• Age des malades
• Symptômes 
• depuis quand  ____________
• mortalité par jour _____ pendant combien
  de jours ______
• chute de ponte par jour _____ pendant
  combien de jours ______
• baisse de consommation
• aspect extérieur  tête sinus crête barbillon
  s pattes
• respiratoire  toux jetage dyspnée
• digestif  diarrhée sang couleur 
• nerveux  prostration convulsions torticolis
• silence

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Critères zootechniques mortalité
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  mortalité en 1 jour mortalité par jour pendant 2 jours consécutifs mortalité par jour pendant 2 jours consécutifs
      J J 1
DINDES Chair plein air 4 0,5 0,5
POULETS DE CHAIR Chair plein air 4 0,5 0,5
POULE PONDEUSES En ponte 4 0,5 0,5
PINTADES Chair plein air 4 0,25 0,25
CANARDS Chair 2 0,5 0,5
  PAG 2 0,25 0,25
OIES Chair 2 0,5 0,5
FAISANS   4 0,25 0,25
PERDRIX   4 0,25 0,25
COLVERTS   4 0,25 0,25
PIGEONS Jeunes 4 1 1
PIGEONS adultes 4 0,25 0,25
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Critères dalerte mortalité

• Quelques exemples

Effectif lot 4 mortalité sur 1 jour 1 par jour sur 2 jours
Dinde chair 500 20 5
Poulet standard 1 000 40 10
Pondeuse œuf consommation 1 000 40 10
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Critères dalerte mortalité

• Une mortalité lot de 1000 poulets
• importante et
• en progression

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Critères dalerte mortalité

• Quelques exemples canard
• Niveau de mortalité ? Particularités de lespèce
  canard

Effectif lot 2 mortalité sur 1 jour 0.5 par jour sur 2 jours
Canard chair 1 000 20 5
Prêt A Gaver 700 15 3-4
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AUTOPSIES

• Suspicion ne pas apporter ni envoyer au
  laboratoire
• Précautions protection des personnes et
  pratique de lautopsie en évitant la diffusion
  des matières virulentes
• Autopsie des morts et des moribonds en préservant
  des animaux pour les analyses officielles en cas
  de déclenchement de suspicion

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En cas de signes cliniques inhabituels

• Démarche diagnostic élimination des hypothèses
  les plus probables pour lespèce , lâge
  considéré et la région ( diagnostic
  différentiel )

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CYANOSE DE LA CRETE ET DES BARBILLONS
I.A.H.P ? PASTEURELLOSE ?
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LESIONS HEMORRAGIQUES
I.A.H.P
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TRACHEITE HEMORRAGIQUE
I.A.H.P
Laryngo.Trachéite.Infectieuse
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Lésions hémorragiques
I.A.H.P ? PASTEURELLOSE ? ROUGET ?
NORMAL
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LESIONS SEPTICEMIQUES
I.A.H.P
PANCREATITE
TYPHOSE
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LESIONS HEMORRAGIQUES
NEWCASTLE
GUMBORO
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SIGNES NERVEUX
ENCEPHALOMALACIE
Botulisme
NEWCASTLE
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Mais FAISANS , CAILLES , PINTADES , AUTRUCHES
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PARAMYXOVIROSE DU PIGEON
VACCINATION OBLIGATOIRE
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Influenza aviaire les moyens de diagnostic
expérimental
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Le paysage des grippes animales
AH3N8
AH1 à H16
AH1N1 H3N2
AH5,H7
Virus B,C et AH1N1, H3N2
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Quelles sont les caractéristiques des virus
grippaux?
H16N9
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Quelles sont les caractéristiques des virus
grippaux?

• Des virus très évolutifs
• Virus à ARN ? Mutations
• ARN segmenté ?  mélanges  de 8 brins dARN
• Des virus peu résistants dans le milieu extérieur
• La contamination est essentiellement associée à
  lanimal infecté, vivant ou mort.
• MAIS peut survivre plusieurs semaines en milieu
  liquide
• Inactivé en quelques secondes à 70C
• 2 à 6 jours à 37C
• gt7 jours à 20C
• gt1 mois à 4C
• gt100 jours lisier en hiver

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Quelles sont les conséquences pour le diagnostic?

• Des virus très évolutifs
• Variation antigénique et génétique variable selon
  les protéines
• Forte pour HA et NA (exposées au Systéme Immuno)
• Faible pour NP et M1/M2
• Cibles  universelles  pour le diagnostic (IDG
  et RT-PCR)
• Des virus peu résistants
• Nécessité de travailler sur des cadavres frais
  et animaux moribonds
• Acheminement rapide sous froid positif (DDSV)

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Les relations hôte-virus dépendent du virus

• Infection localisée aux muqueuses respiratoires
  et digestives
• IAFP (H1 à H16)
• Infection systémique diffusion du virus dans
  tous les tissus
• IAHP (H5 et H7)
•  Peste aviaire 

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Virus H5/H7 Faiblement ou Hautement pathogène?

Hémagglutinine
Site de clivage

• ------PEIPKGRGLF--- FP
• -----PENPKGRGLF--- FP
• ---PEIPKKKKRGLF--- HP
• -PETPKRKRKRGLF--- HP
• -PEIPKKREKRGLF--- HP
• --PETPKRRRRGLF--- HP

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En bilan

• Les virus IA ont un comportement variable
• Tropisme digestif et/ou respiratoire
• Virulence variable selon les hôtes
• Virulence variable selon les génotypes
• Deux schémas pathogéniques
• IAHP distribution généralisée du virus
  viscères prélèvements de choix
• IAFP distribution essentiellement mucosale
  écouvillons trachéaux /cloacaux
• Un virus H5/H7 FP est un HP en puissance
• Mutation ponctuelle au site de clivage suffit

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Le diagnostic virologique principes

• Objectifs
• isoler le virus ou détecter sa signature
  (protéine, séquence génétique)
• Si Influenza Aviaire? caractériser lisolat
  (pathogénicité)
• Techniques disponibles
• Isolement viral
• RT-PCR

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Le diagnostic virologique isolement viral

• Inoculum broyat dorganes
• ou écouvillons
• Inoculation dœufs embryonnés
• Voie allantoïdienne
• Délai de réponse 2 à 12 jours
• Si mortalité embryonnaire IHA (inhibition de
  lhémagglutination)
• Si H5/H7 séquençage site de clivage IPIV
• Si non H5/H7 et suspicion IAHP IPIV
• encéphaletrachéepoumonratefoierein
  intestins

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La caractérisation du pouvoir pathogène

• Méthode de référence indice de pathogénicité
  par inoculation IV (IPIV)
• Inoculation de 10 poulets de 6 semaines
• Suivi clinique sur 10j
• Score 0 si RAS / 1 si 1 signe majeur / 2 si 2
  signes majeurs / 3 si mort
• Index total des scores/ nb jours. Si gt 1,2
  IAHP
• Réponse sous 10 jours
• Analyse moléculaire du site de clivage
  hémagglutinine
• Très bien corrélé au pouvoir pathogène
• Réponse sous 48h

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Le diagnostic sérologique Techniques

• Pour des enquêtes et complément
• de diagnostic (séroconversion en 8 jours)
• Immunodiffusion en gélose (IDG)
• Détection des Ac précipitants
• Utilisée chez poulet et dinde
• Délai 48h
• Inhibition de lhémagglutination (IHA)
• Détection de lHémagglutinine
• Utilisée chez palmipèdes, pintades
• et cailles
• Délai 24h

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En pratique principes à retenir pour les
prélèvements

• Pour la virologie
• Prélèvements de tissus les plus frais possibles
  (idéal animal mourrant sacrifié)
• Attention au choix des animaux morts rejeter
  tout animal dont les tissus sont autolysés
• Prélever les tissus les plus proprement possible
  pour faciliter la mise en culture
  (contaminations)
• Acheminer en urgence au laboratoire agrée
• Pour la sérologie (cf CD-rom)
• Coucher le tube dès après le prélèvement pour
  faciliter la formation du caillot
• Laisser à température ambiante 2 à 3 heures, puis
  au frigo (4C)

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En pratique conduite à tenir face à une
mortalité groupée doiseaux sauvages

• Instruction des pouvoirs publics (DDSV) Note de
  service DGAL/SDSPA/N2005-8235 du 19 octobre 2005
• Dans le cadre dune mortalité groupée doiseaux
  sauvages, les cadavres doivent être transmis
  ENTIERS au LVD, seul habilité à effectuer les
  opérations sur les cadavres, en fonction des
  instructions du DDSV local

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Biosécurité

• Matériel de base dans la voiture
• Équipements de protection individuelle
• Appareils de protection respiratoire jetables
  filtrants contre les aérosols (au minimum FFP2)
  avec soupape si possible
• Lunettes de protection contre les
  poussières(réutilisables)
• Gants de protection étanches résistants aux
  agressions mécaniques
• (si pas de risque de coupure, déchirure ou
  perforation, gants à usage unique)
• Vêtements de protection à usage unique ,si pas de
  capuche charlotte
• Bottes étanches, surbottes
• Désinfectants usuels virucides homologués

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Procédure pour enlever les équipements de
protection individuels

• But protéger la voie respiratoire et lœil
• Ordre important
• Lavage des mains itératif indispensable à
  différentes étapes
• Retrait des gants (laver au préalable mains
  gantées)
• Retrait de la combinaison jetable en évitant de
  toucher effets personnels et cheveux
• Lavage des mains
• Retrait des lunettes
• Retrait de lappareil de protection respiratoire
• Lavage des mains et du visage

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Procédure pour enlever les équipements de
protection individuels

• Jeter les protections individuelles à usage
  unique dans un sac hermétiquement fermé
• Nettoyer et désinfecter les protections
  individuelles réutilisables
• Opérations dans la zone intermédiaire
• Désinfection du véhicule

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Remerciements crédits photos et illustrations

• Ilaria CAPUA
• Samuel BOUCHER
• Jean-Marc HUGUET
• Dominique BALLOY
• Cab. vet. SEL BAILLEUL-SEGUIN
• Jean-Luc GUERIN, ENVT
• Marc ARTOIS, ENVL