Diapositiva 1

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TECNICATURA EN ANÁLISIS CLÍNICOS
TECNICATURA EN ANÁLISIS CLÍNICOS
TECNICATURA EN ANÁLISIS CLÍNICOS
BIOQUÍMICA CLASE 3
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ENZIMAS
Las enzimas son proteínas, producidas por los
seres vivos que tienen capacidad para catalizar
con gran eficiencia procesos muy específicos. Un
catalizador es una sustancia que aumenta la
velocidad de una reacción, sin verse alterada en
el proceso global.
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Ejemplos de reacciones enzimáticas glucólisis.
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Ejemplos de reacciones enzimáticas ciclo de la
urea (hepatocitos).
1- carbamoil-fosfato-sintetasa I 2- ornitina
transcarbamoilasa 3- argininosuccinato sintetasa
4- arginino succinato liasa 5- arginasa
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Las enzimas ejercercen su poder catalítico en
condiciones suaves de temperatura, pH, presión,
etc., compatibles con la vida. Además, las
enzimas son catalizadores susceptibles de
regulación en su actividad, lo que permite
armonizar el entramado metabólico de acuerdo con
las necesidades del organismo.
Ausencia de enzimas NO metabolismo celular
NO vida
Aplicaciones de las enzimas
- Análisis clínico
- Aplicaciones médicas
- Aplicaciones industriales
Química orgánica Química farmacéutica
Alimentación Detergentes Textil
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• Coenzimas Ciertas enzimas requieren de ciertos
  compuestos para cumplir con su función
  catalítica estas moléculas se denominan
  coenzimas y son generalmente vitaminas o metales.
  
• Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se
  unen a las enzimas y disminuyen su actividad.
  Algunos anticoagulantes pueden actuar como
  inhibidores enzimáticos.

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Inhibidor enzimático
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Isoenzimas
Formas multiples de una enzima
Definición
Isoenzimas o Isozimas son cualquiera de las
múltiples formas de una enzima, proveniente de
diferencias determinadas genéticamente en la
estructura primaria.
El término Isoenzima es un término operacional,
que hace referencias a un conjunto de enzimas que
catalizan la misma reacción en la misma célula o
en el mismo organismo.
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Láctico deshidrogenasa posee 5 isoenzimas
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Creatinafosfokinasa

• Posee tres isoenzimas.
• CK-MM o CK 3 (localización muscular)
• CK-MB o CK2 (localización cardíaca)
• CK-BB o CK 1(localización cerebral)

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Clasificación de las enzimas según el tipo de
reacción que catalizan

• Oxidorreductasas
• Transferasas
• Hidrolasas
• Liasas
• Isomerasas
• Ligasas

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Enzimología Clínica

• Se define a la enzimología clínica como a la
  aplicación del estudio de las enzimas. La
  cuantificación de las enzimas se realiza a través
  de la medida de la velocidad de reacción del
  sistema que catalizan.

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Clasificación clínica de Bücher

• Enzimas Plasmoespecíficas
• 2. Enzimas secretadas o exocitoenzimas
• 3. Enzimas celulares o endocitoenzimas

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Clasificación clínica de Bücher

• 1. Enzimas Plasmoespecíficas
• Enzimas que participan en la coagulación (ej
  plasminógeno, protrombina) pseudocolinesterasa.
• Son sintetizadas fundamentalmente por el
  hepatocito.
• Interesa fundamentalmente sus valores inferiores.
  Una disminución de su actividad indica alteración
  de la síntesis (alteración de la funcionalidad
  hepática).

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2.Enzimas secretadas o exocitoenzimas.

• Son enzimas secretadas por glándulas o tejidos
  muy especializados.
• Ejemplo enzimas digestivas pancreáticas que
  actúan en el duodeno
• amilasa
• Lipasa
• tripsina

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3.Enzimas celulares o endocitoenzimas

• Tienen lugar de acción dentro de la misma célula
  que las sintetiza, no tienen acción en el plasma.
• Ubicuas (LDH, GPT, GOT, CK)
• Organoespecíficas. (enzimas del ciclo de la urea
  5 nucleotidasa isoenzimas específicas como CK
  MB, LDH1)

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ENZIMAS PANCREÁTICAS
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ENZIMAS PANCREÁTICAS

• Baja actividad en sangre
• Sus niveles aumentan en patologías agudas como
  pancreatitis aguda.
• En patologías crónicas su actividad está
  disminuída en su lugar de acción (duodeno).

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Determinación de enzimas séricas hepáticas.
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Determinación de enzimas séricas hepáticas.

• Enzimas de interés clínico (Hepatopatías)
• Transaminasas (GOT/GPT).
• Fosfatasa alcalina (FAL)
• Gammaglutamiltranspeptidasa (GGT)
• 5 nucleotidasa (5ND)

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(No Transcript)
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• Hepatitis Lesión o necrosis de los hepatocitos
• Etiología fundamentalmente viral también puede
  ser de origen tóxica o autoinmune.
• Colestasis Impedimento total o parcial de la
  llegada de la bilis al duodeno por incapacidad
  para su formación o flujo causado por una gran
  cantidad de enfermedades.
• Etiología Intrahepáticas (ej hepatitis aguda,
  hepatitis crónica, cirrosis , tumores o quistes
  hepáticos) Extrahepáticas (ej Litiasis biliar,
  tumores).
• Perfil hepático
• - Marcadores de compromiso inflamatorio y/o
  compromiso necrótico
• Transaminasas (GPT/GOT)
• Glutamato deshidrogenasa (GDH)
• sorbitol deshidrogenasa (SDH).
• - Marcadores de compromiso colestásico
• Fosfatasa alcalina (FAL)
• Gammaglutamiltranspeptidasa(GGT)
• 5Nucleotidasa.

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Transaminasas (GPT/GOT).

• Realizan reacciones de transaminación
  (transferencia del grupo amino de un aminoácido
  dador a un cetoácido aceptor).
• No son específicas del hígado (también se
  encuentran en músculo, corazón, páncreas y
  cerebro).
• En todas las enfermedades hepáticas que cursan
  con necrosis celular existe hipertransaminasemia
  (en hepatitis víricas y tóxicas aumentan hasta 10
  veces el valor normal)

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Gammaglutamiltranspeptidasa (GGT)

• Cataliza la transferencia de grupos gammaglutamil
  de un péptido a otro o de un péptido a un
  aminoácido.
• Se encuentra en riñón, páncreas, hígado, bazo y
  el pulmón.
• Aumenta en la mayoría de las enfermedades del
  hígado.

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Fosfatasa alcalina (FAL)

• Se encuentra en hígado, riñón, placenta,
  intestino, huesos y leucocitos).
• Durante el crecimiento, los niveles séricos son
  altos debido al aumento de la fracción ósea, lo
  mismo ocurre durante el embarazo).
• Valores de referencia
• Adultos 15-69 UI/l
• Niños hasta 150 UI/l

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Determinación de enzimas séricas en el infarto de
miocardio

• Creatinafosfokinasa Posee tres isoenzimas.
• CK-MM o CK 3 (localización muscular)
• CK-MB o CK2 (localización cardíaca) (6-8 hs)
• CK-BB o CK 1(localización cerebral)
• Lactato deshidrogenasa
• LDH1 (24-60 hs)
• GOT (16-48 hs)

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Infarto de miocardio
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Determinación de enzimas en el laboratorio.

• Métodos de una sola medida o de tiempo de
  incubación fija Se determina la actividad de la
  enzima, después de actuar en el sistema durante
  un tiempo determinado, midiendo luego,
  colorimetricamente un producto de reacción, o la
  disminución de un sustrato.
• Métodos cinéticos o de medidas múltiples o de
  monitoreo continuo Se determima la variación de
  absorción de algún componente del sistema
  (sustrato o producto de la reacción) a través de
  varias medidas sucesivas en intervalos cortos de
  tiempo, que aseguren la linealidad de la reacción
  (velocidad de reacción constante).

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Cinética enzimática
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Lactato deshidrogenasa (LDH)EC 1.1.1.27Método
cinético según la Federación Internacional de
Química Clínica (IFCC)
?
LDH
?

• L-lactato NAD Piruvato NADH H

Reactivos NAD L() Lactato Buffer
N-metil-D-glucamina Condiciones Temperatura
300,05 C pH 9,4 0,05
Medición de la absorbancia (340 nm) cada 10
segundos durante 2-3 minutos.
UI
?A

l
? b min l
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Espectrofotometría

• La espectrofotometría es el método de análisis
  óptico más usado en las investigaciones
  biológicas. El espectrofotómetro es un
  instrumento que permite comparar la radiación
  absorbida o transmitida por una solución que
  contiene una cantidad desconocida de soluto, y
  una que contiene una cantidad conocida de la
  misma sustancia.
• Todas las sustancias pueden absorber energía
  radiante, aun el vidrio que parece ser
  completamente transparente absorbe longitud de
  ondas que pertenecen al espectro visible el agua
  absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
• La absorción de las radiaciones ultravioleta,
  visibles e infrarrojas depende de la estructura
  de las moléculas, y es característica para cada
  sustancia química.
• Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de
  la energía es absorbida la energía radiante no
  puede producir ningún efecto sin ser absorbida.

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Espectrofotómetro UV/visible de doble
hazEvolution 600 UV-Vis
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(No Transcript)