BARVEN

1
BARVENÍ MIKROSKOPICKÝCH PREPARÁTU

• (BIOLOGICKÁ TECHNIKA)

2
BARVENÍ je biochemická metoda, kterou se pridá
k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a
slouží v biologii k prokázání výskytu
(kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci)
specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v
pletivu, nebo k obarvení celých struktur a
objektu. Jednotlivé bunecné struktury nejsou v
mikroskopu pri pozorování bez predchozího
zbarvení témer rozlišitelné pro stejný nebo jen
málo odlišný lom svetla.
BARVIVA
Prirozená Umelá
Kyselá Zásaditá Neutrální
3
Prirozená barviva

• hematoxylin - extrakt z kampeškového dubu
  (Haematoxylon campechianum)
• - bazické barvivo

4
Prirozená barviva

• karmín - extrakt ze samicek cervce nopálového
  (Coccus cacti)
• - bazické barvivo

5
Prirozená barviva

• orcein - extrakt z nekterých lišejníku

6
Prirozená barviva

• šafrán - extrakt z blizen šafránu (Crocus
  sativus)
• - kyselé barvivo - na kolagen

7
Prirozená barviva

• V minulosti bylo užíváno více prirozených barviv,
  napr.
• indigokarmín
• berberin - kyselé barvivo
• brazilin - bazické barvivo podobné hematoxylinu

8
Umelá barviva
A/ XANTINOVÉ DERIVÁTY

• eosin (tetrabrom fluorescein)
• - barví acidofilní složky tkání

9
Umelá barviva

• erytrosin (tetrajodfluorescein)
• - barví acidofilní složky tkání

• fluorescein

10
Umelá barviva
B/ TRIFENYLMETANOVÁ BARVIVA

• bazický fuchsin - základ i pro další barviva
  jako jsou Schiffovo reagens,
• rezorcifuchsin a
  aldehydfuchsin

• anilínová modr, svetlá zelen a kyselý fuchsin -
  kyselá barviva

11
Umelá barviva
C/ THIAZINOVÁ BARVIVA

• thionin, toluidinová a methylenová modr -
  bazická barviva

D/ AZOBARVIVA

• Janusova zelen - napr. pro supravitální barvení
  mitochondrií
• olejová cerven a sudanová cern - barviva na tuky

12

• Kyselá, barvící plasmu (též plasmatická) -
  eosin, svetlá zelen, oranž G,
• kyselý fuchsin,
• Zásaditá, basická, barvící jádro (též jaderná
  barviva) - toluidinová modr,
• metylová zelen, basický fuchsin,
• hematoxylin
• Neutrální - napr. eosinát methylenové modri.

13
TYPY BARVENÍ
A1/ progresivní - barvíme až je dosaženo žádaného
zbarvení, A2/ regresivní - napred tkán
prebarvíme, pak prebytecné barvivo
odstranujeme. B1/ sukcedánní - nekolik barviv po
sobe, B2/ simultánní - více barviv soucasne. - v
obou prípadech musí každé barvivo barvit jinou
cást tkáne C1/ substantivní - tkán barvíme prímo
barvivem, C2/ adjektivní - barvení
prostrednictvím moridla, které se váže prímo na
tkán Vitální barvení je zpusob, kdy je tkán
barvena za živa. Rozeznáváme barvení intravitální,
kdy barvíme prímo v tele zvírete a barvení
supravitální, kdy barvíme z tela vynatou tkán.
14
Vitální barvení karmín - potravní
vakuoly Janusova zelen - mitochondrie Methylenová
modr - odliší živé bunky od mrtvých živé bunky
se neobarví, proto- že pumpují modr ven. Výber
barviva závisí na objektu barvení a strukturách,
které chceme barvit Motolice, tasemnice -
borax-karmín Prvoci - Giemsa-Romanowski,
hematoxylin Tkáne - hematoxylin-eosin Barvení
povrchového reliéfu - opálová modr, Burriho tuš.
15

• ÚKOLY
• 1/ Pozorování a barvení živých prvoku z nálevu
• Postup
• na podložní sklo dejte kapku nálevu a prikryjte
  (pro zvolnení rychlosti pohybu prvoku
• poslouží vata)
• vedle krycího sklícka kápnete kapku inkoustu -
  je videt cytostom a trichocysty
• kapku tuše - je videt plnící se potravní
  vakuola.
• 2/ Barvení trepek aj. nálevníku po usmrcení
• na podložní sklo dejte po kapce trepek, usmrtte
  kapkou Lugolova roztoku, který
• prikápnete (3-6 minut), prikryjte krycím
  sklíckem
• vedle krycího sklícka z jedné strany kápnete
  kapku modrého inkoustu, obarví se
• jádro (makronukleus)
• z druhé strany prikápnete kapku cerveného
  inkoustu, obarví se cytoplazma.
• POZORUJTE A ZAKRESLETE!!!

16
(No Transcript)
17
(No Transcript)
18
(No Transcript)
19
(No Transcript)
20
(No Transcript)