Spettroscopie atomiche

1
Spettroscopie atomiche

• Emissione atomica
• Assorbimento atomico
• I campioni devono essere mineralizzati

Campione In esame
Conc. HNO3
Microonde fino a digestione completa
2
Emissione atomica
D
Monocromatore o filtro
3
(No Transcript)
4
Assorbimento atomico

• Bruciatore
• Fornetto

D
Lente
5
Lampada a catodo cavo
6
Bruciatore
7
Fornetto di grafite
8
(No Transcript)
9
Spettroscopie di diffusione della luce
Collisione elastica tra il fotone e la particella
Lintensità è dispersa su 4p
E
E0
10
Diffusione elastica (Rayleigh)
?
Polarizzabilità
11
Diffusione di Raman
?vib
12
(No Transcript)
13
Sono attive in Raman le vibrazioni in cui cambia
la polarizzabilità
14
Transizioni attive in IR che possono mascherare
lo spettro della biomolecola (es. acqua) non sono
attive in Raman
15
Resonance Raman

• Eccitazione selettiva
• Segnali intensi (stato eccitato più
  polarizzabile)
• Informazioni ristrette al cromoforo e non intera
  proteina (es. eme, FAD)

16
Determinazione colorimetrica di proteine

• Misura diretta a 280 nm
• Aminoacidi aromatici
• Misura diretta a 205 nm
• Legame peptidico
• Metodi indiretti
• Biureto
• Folin-Lowry
• Acido bicinconinico
• Bradford (blu Coomassie G-250)

17
Bradford
Rosso
Blu
18
Biureto
Complesso Rame-Proteina in ambiente
basico 540-550 nm
19
Lowry

• Reazione del biureto ? Formazione di complessi
  di Cu(II) e riduzione a Cu(I) da parte di a.a.
  aromatici
• Riduzione di fosfomolibdotungstato (giallo,
  reattivo di Folin-Ciocalteau) da parte di Cu(I) ?
  colore blu