Larocontamination fongique en secteur pharmaceutique

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Laérocontamination fongique en secteur
pharmaceutique

• Patrick BOIRON
• Laboratoire de Mycologie,
• Faculté de Pharmacie, Lyon, France

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Diaporama disponible à

• http//ispb.univ-lyon1.fr
• Laboratoires
• Mycologie
• Cours de mycologie
• Cours Master Microbiologie Appliquée à
  lAgro-alimentaire, au Biomédical et à
  lEnvironnement
• Laérocontamination fongique en secteur
  pharmaceutique - diaporama

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Plan

• Les zones datmosphère contrôlée
• Définition
• Normes et contexte réglementaire
• Normes ISO 14644 et 14698
• Autres normes ISO 13408, BPF
• La maîtrise de la contamination
• Objectifs
• Sources et vecteurs
• Moyens de maîtrise
• Causes possibles de contamination
• Actions correctives et / ou préventives
• Les moisissures environnementales
• Habitats naturels
• Effets sur la santé humaine
• Méthodes détude

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Plan

• Les zones datmosphère contrôlée
• Définition
• Normes et contexte réglementaire
• Normes ISO 14644 et 14698
• Autres normes ISO 13408, BPF
• La maîtrise de la contamination
• Objectifs
• Sources et vecteurs
• Moyens de maîtrise
• Causes possibles de contamination
• Actions correctives et / ou préventives
• Les moisissures environnementales
• Habitats naturels
• Effets sur la santé humaine
• Méthodes détude

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Les zones datmosphère contrôlée

• Définition

6
Définition

• Années 60  maîtrise des ambiances  en
  microélectronique ? industrie des salles propres
  ou  zones à atmosphère contrôlée  (ZAC)
• salle blanche, salle microbiologiquement
  maîtrisée, zone à empoussièrement contrôlé

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Définition

• Une ZAC est une zone dont le contrôle de la
  contamination est défini et qui est construite et
  utilisée de façon à réduire lintroduction, la
  multiplication ou la persistance de substances
  contaminantes

8
Les zones datmosphère contrôlée

• Normes et contexte réglementaire

9
Les différentes normes pour salles propres

• 1963 la  Federal Standard  (USA) définit les
  classes dempoussièrement en concentrations
  maximales de particules dans lair dont les
  dimensions sont supérieures ou égales à un
  diamètre donné

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 Federal Standard  209

• Exemple la classe 100 se définit par  pas
  plus de 100 particules de taille ? 0,5 µm par
  pied cube dair échantillonné 
• 1 pied cube 28,3 L

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Démarche normative internationale

• Adoption du système métrique en 1992 (FS 209
  version E)
• Classe 100 3.500 particules de 0,5 µm par m3
  dair ? classe M 3,5
•  Japan Industry Standard  (JIS 9920)
  particules de 0,1 µm
• AFNOR,  British Standards  (BS 5295),  Verein
  Deutscher Ingenieure  (VDI 2083)

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Harmonisation des normes

• Nouvelle normes internationale ISO 14644-1
  (1999) et 14644-2 (2000), homologuée en Norme
  Européenne (EN) en Europe
• ISO  International Standardisation
  Organisation 

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Les zones datmosphère contrôlée

• Normes ISO 14644 et 14698

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Normes ISO

• La nouvelle génération des références normatives
  ISO sur les  salles propres et environnement
  maîtrisés apparentés  comprend les normes ISO
  14644 et 14698
• Ces normes posent les exigences et les méthodes
  de maîtrise pour un ensemble de paramètres (et
  non plus seulement les contaminants particulaires)

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Normes ISO et réglementation nationale

• Mais
• Chaque pays, voire chaque industrie, possède sa
  propre réglementation
• La réglementation a priorité sur la norme !

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ISO 14644-1

• Cette norme présente un nouveau système de
  classification des salles propres par la propreté
  de lair (concentration par m3 des particules de
  0,1 µm)
• Cn 10N x (0,1/D)2,08

Cn concentration maximale admissible N
classe ISO D taille des particules
17
ISO 14644-2

• La norme ISO 14644-2 établit les essais à
  effectuer et leur fréquence minimale, en vue de
  surveiller et prouver la conformité de la classe

18
Types dessais de la norme ISO 14644-2

• Un programme de surveillance, fondé sur une
  analyse de risques, doit être écrit
• Il doit prendre en compte le suivi de la
  concentration particulaire avec les points
  imposés suivants
• Points déchantillonnage, volume minimal dair
  pour prélèvement, durée des mesurages, taille des
  particules
• Limites acceptables, niveaux dalerte, niveau
  daction
• ? Installation conforme ou non conforme (remise
  en conformité ? nouveaux essais de maintien de la
  conformité requalification)

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ISO 14644-3

• Complète les normes ISO 14644-1 et 2
• Définit les normes de métrologie et dessais
  nécessaires pour caractériser les performances
  des salles propres

Métrologie science de la mesure ensemble des
techniques qui permettent d'évaluer des
performances
20
ISO 14644-3

• Différents essais sont ainsi spécifiés
• Pour les 3 états possibles doccupation
• Après construction,
• Au repos
• En activité
• Pour les 2 types de flux dair
• Ecoulement unidirectionnel
• Ecoulement non unidirectionnel

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ISO 14644-3

• Les procédures dessais comprennent
• Le comptage des particules ultrafines et des
  macro-particules en suspension dans lair
• Le mesurage du débit dair, de la pression
  différentielle dans lair, de la température, de
  lhumidité
• La recherche de fuites sur un système de
  filtration, la visualisation des flux dair
• Les essais de la direction découlement dair,
  lessai électrostatique et le test générateur
  dions, les essais de sédimentation des
  particules, de récupération et de fuite du
  confinement

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ISO 14644-4

• Cette norme a pour objet de spécifier la
   conception, la construction et la mise en
  fonctionnement  des salles propres
• Mais cette norme nimpose pas les moyens pour
  atteindre ces exigences car ils restent dans le
  champ de discussion entre client et fournisseur

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Autres normes ISO 14644

• La norme ISO 14644-5 traite de lexploitation des
  salles, après réception et mise en route
• Dautres normes sont en projet
• ISO 14644-6 termes et définition
• ISO 14644-7 enceintes séparatives
• ISO 14644-8 maîtrise de la contamination
  moléculaire

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ISO 14698

• La famille des normes ISO 14698 concerne  la
  maîtrise de la biocontamination 
• Ces documents permettent de guider les
  utilisateurs dans leur analyse de risques pour
  leur permettre de choisir les réponses
  technologiques appropriées

25
ISO 14698-1

• Cette norme présente les principes généraux de la
  démarche de la maîtrise de la biocontamination,
  notamment avec le recours à un système danalyse
  des dangers et des risques

26
ISO 14698-1

• La norme présente, en annexe, des méthodes de
  mesurage de la biocontamination des différents
  milieux (air, surfaces, textiles, liquides,
  entretien des tenues, formation spécifique des
  personnels)

27
ISO 14698-2

• Cette norme établit les principes destimation et
  dévaluation des données (interprétation) dans la
  phase de surveillance initiale et dans la phase
  de surveillance régulière

28
ISO 14698-3

• Cette norme concerne une méthode de laboratoire
  permettant de mesurer lefficacité de méthodes de
  nettoyage et de désinfection des surfaces, en
  présence de souillures humides ou de biofilms

29
Les zones datmosphère contrôlée

• Autres normes ISO 13408, BPF

30
ISO 13408

• La norme ISO 13408 a pour objet le  traitement
  aseptique des produits de santé 
• Elle traite notamment de la conception de
  linstallation, de létat de santé et de
  formation du personnel, des exigences
  vestimentaires, du nettoyage et de la désinfection

31
ISO 13408

• Concernant la surveillance microbienne de
  lenvironnement, des contrôles réguliers doivent
  être effectués (exemple prélèvements sur
  vêtements et gants)
• Des contrôles supplémentaires sont aussi
  recommandés dans le cas dune période prolongée
  darrêt de la zone aseptique ou après toute
  modification apportée à linstallation

32
ISO 13408

• Le programme de surveillance doit être décrit
  dans une procédure détaillant entre autres
• La fréquence des contrôles
• Le type de contrôles
• Les points contrôlés
• Les niveaux dalerte et daction
• Les mesures à prendre si les spécifications sont
  dépassées

33
BPF

• Selon les Bonnes Pratiques de Fabrication (BPF)
  de la réglementation française, les ZAC destinées
  à la fabrication des produits stériles sont
  classées  selon les qualités requises pour leur
  environnement 
• Chaque opération de fabrication requiert un
  niveau approprié de propreté de lenvironnement
  de façon à réduire le risque de contamination
  particulaire ou microbienne des produits ou des
  substances manipulés

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BPF

• Les résultats de la surveillance doivent être
  pris en compte lorsque la documentation
  accompagnant les lots est examinée en vue de la
  libération des produits finis

35
BPF

• Des seuils dalerte et daction appropriés
  doivent être définis pour les résultats de la
  surveillance particulaire et microbiologique
• En cas de dépassement de ces limites, des
  procédures opérationnelles doivent imposer des
  mesures correctives

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Surveillance particulaire (BPF)

• Les BPF distinguent 4 classes de ZAC

37
Surveillance particulaire (BPF)

• Les zones sont contrôlées dans 2 situations
• Au repos, cest-à-dire à larrêt de la
  production, en labsence du personnel, après un
  temps dépuration de 15 à 20 minutes
• En activité, cest-à-dire dans le cas où les
  installations fonctionnent selon le mode
  opératoire défini et en présence du nombre prévu
  dopérateurs

38
Surveillance particulaire (BPF)
39
Surveillance microbienne (BPF)
40
Plan

• Les zones datmosphère contrôlée
• Définition
• Normes et contexte réglementaire
• Normes ISO 14644 et 14698
• Autres normes ISO 13408, BPF
• La maîtrise de la contamination
• Objectifs
• Sources et vecteurs
• Moyens de maîtrise
• Causes possibles de contamination
• Actions correctives et / ou préventives
• Les moisissures environnementales
• Habitats naturels
• Effets sur la santé humaine
• Méthodes détude

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La maîtrise de la contamintion

• Objectifs

42
Objectifs

• On définit la contamination par la présence dun
  élément indésirable (solide ou liquide) dans un
  produit, dans un fluide, sur une surface ou dans
  un espace protégé
• La biocontamination est caractérisée par la
  présence de microorganismes indésirables pouvant
  entraîner, chez lhomme ainsi que sur les
  produits de fabrication, des perturbations
  qualitatives ou quantitatives, immédiates ou
  différées

43
Objectifs

• La maîtrise de la contamination a pour objectif
  de protéger, ensemble ou séparément
• Le produit
• Lopérateur
• Le patient
• Lenvironnement

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Objectifs

• Dans le cas dun produit, il sagit de le
  fabriquer et de le conditionner en le protégeant
  à la fois de la contamination extérieure (air
  ambiant extérieur) et de la contamination
  intérieure liée aux équipements et procédés de
  fabrication (machines, personnel, matières
  premières, fluide process, etc.)

45
Objectifs

• Dans le procédé de fabrication de certains
  produits pharmaceutiques, lopérateur peut être
  amené à manipuler des produits nocifs pour sa
  santé dont il doit naturellement être protégé

46
Objectifs

• Pour les produits pharmaceutiques, il sagit
  aussi de protéger la santé du patient

47
Objectifs

• Il faut également préserver lenvironnement des
  risques liés à la manipulation de produits
  dangereux (cas des médicaments à base de virus ou
  de microorganismes)

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Objectifs

• Les principales motivations qui conduisent à
  prendre un compte la maîtrise de la contamination
  sinscrivent dans 2 cas de figure
• Le caractère incontournable de lutilisation de
  technologies de maîtrise de la contamination,
  imposé par
• Les contraintes de sécurité et de conformité
  réglementaire
• Les exigences technico-économiques nécessitant la
  baisse des coûts de production et lobtention du
  niveau de qualité requis par le marché
• La recherche davantages concurrentiels par la
  qualité des produits fabriqués, la volonté de
  lentreprise de se différencier, notamment au
  niveau de son image de marque et du marketing

49
La maîtrise de la contamination

• Sources et vecteurs

50
La maîtrise de la contamintion

• Sources et vecteurs
• Contamination microbiologique

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Sources et vecteurs

• Les éléments indésirables, responsables de
  contaminations, comprennent
• Des microorganismes vivants ou revivifiables
• Des poussières ou particules inertes
• Des contaminants chimiquement actifs
  contamination chimique sous forme gazeuse,
  liquide ou solide, ou contamination moléculaire

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Contamination microbiologique

• Les microorganismes responsables de la
  contamination microbiologique peuvent appartenir
  à trois grandes familles
• Les bactéries
• Les virus
• Les champignons

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Contamination microbiologique

• Ces organismes vivants sont universellement
  présents dans lenvironnement sol, eau et air
• Ils sont le plus souvent adsorbés sur des
  surfaces, inertes ou biologiques, et forment, par
  leur prolifération, des dépôts appelés biofilms
• Du fait de leur faible masse, ils peuvent
  facilement être entraînés en suspension dans
  lair où ils sont souvent adsorbés sur des
  particules inertes

54
Contamination microbiologique

• Ces particules viables peuvent être classées en
  trois catégories
• Pathogènes, susceptibles dinduire des
  modifications nuisibles chez un être vivant
• Saprophytes ou commensales, pouvant vivre ou se
  développer sur un organisme vivant sans entraîner
  de manifestation pathologiques
• Opportunistes, dont le risque pathogène dépend de
  la fragilisation ou de létat de réceptivité de
  lorganisme vivant concerné

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Contamination microbiologique

• Comme les microorganismes ont des
  caractéristiques et des modes de multiplication
  différents, leur limitation passe par
  lutilisation de moyens adaptés à chacun deux
• Aussi est-il nécessaire, pour protéger
  efficacement un produit dune contamination, de
  connaître la nature des contaminants susceptibles
  de le coloniser

56
Les bactéries

• Les bactéries sont omniprésentes dans
  lenvironnement de lhomme et sur lhomme lui-même

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Les bactéries

• Selon leur constitution chimique de surface, qui
  conditionne leur aptitude à fixer différemment
  des colorants, on distingue les bactéries à
  coloration de Gram positive et négative

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Les bactéries Gram -

• Les enzymes nécessaires à la nutrition et à la
  multiplication sont localisés dans et à
  lextérieur de la paroi

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Les bactéries Gram

• A linverse, les bactéries Gram ont des enzymes
  en position plus interne, adaptées à de hautes
  densités de population, dans un milieu riche

60
Les bactéries

• Les désinfectants chimiques auront une meilleure
  efficacité sur les bactéries Gram du fait de la
  position plus externe de leurs enzymes

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Les virus

• Le génome dun virus nest formé que par un seul
  type dacide nucléique ARN ou ADN
• Les virus ne possèdent pas linformation
  génétique nécessaire pour une réplication
  autonome
• Ne possédant pas non plus de métabolisme
  énergétique, ils se comportent comme des
  parasites obligatoires de cellules vivantes dont
  ils détournent à leur profit les métabolismes
  énergétiques et synthétiques
• Ils ont leurs propres capacités de résistance aux
  agents de destruction des bactéries étant plus ou
  moins sensibles aux radiations et aux
  antiseptiques

62
Les champignons microscopiques

• Les champignons microscopiques ou
   micromycètes  regroupent les levures et les
  champignons filamenteux

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Les champignons microscopiques

• Ce sont des agents très dangereux non seulement
  pour les récoltes et les stocks alimentaires,
  mais aussi pour les patients en milieu hospitalier

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Les champignons microscopiques

• En industrie pharmaceutique, ce sont des
  microorganismes pouvant être responsables de
  biocontaminations dans les zones de fabrication

65
Les champignons microscopiques

• Parmi les champignons filamenteux, les
  moisissures sont responsables de nombreux
  phénomènes daltération dus à leur pouvoir de
  sécrétion denzymes hydrolytiques (amylases,
  protéases, lipases, etc.)
• Certaines espèces toxinogènes sont responsables
  daltération de la qualité sanitaire des produits
  (mycotoxine)

66
La maîtrise de la contamintion

• Sources et vecteurs
• Sources de contamination

67
Sources de contamination

• On distingue, en général, 5 grands types de
  source de contamination (règle des 5 M)
• La main-doeuvre (personnel)
• Le milieu (environnement air ambiant, surface)
• Les matières (matières premières, fluides
  process, etc.)
• Le matériel (équipement de production, de
  contrôle, de nettoyage, de maintenance, de
  sécurité, de transfert, dexploitation, etc.)
• Les méthodes (production, maintenance, nettoyage,
  contrôle, transfert, etc.)

68
Le 6ème M

• On peut aussi prendre en compte une dimension
  complémentaire le management (le 6ème M), qui
  permet de veiller à la cohérence et à
  lhomogénéité de lensemble des paramètres

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Main doeuvre

• Lhomme est porteur de microorganismes, qui sont
  généralement des germes saprophytes nentraînant
  aucune infection
• Mais en industrie pharmaceutique, les
  microorganismes portés par lhomme peuvent être
  responsables de la biocontamination des ZAC

70
Main doeuvre

• On distingue 2 types de contamination portées par
  le personnel
• La contamination résidente naturelle, non
  pathogène, non éliminable totalement,
  difficilement transférable, à population stable,
  se reproduisant sur la peau
• La contamination transportée provenant de
  lenvironnement, éventuellement pathogène,
  facilement transférable, ne se reproduisant pas
  sur la peau, pouvant être et devant être
  totalement éliminée

71
Main doeuvre

• Lhomme est alors impliqué de 3 façons dans le
  processus de biocontamination émetteur,
  vecteur, récepteur
• Il devient alors la principale source de
  contamination pour le produit

72
Main doeuvre

• Les supports des microorganismes sont, chez
  lhomme, de 2 natures
• Les émissions cutanées
• Les émissions rhinopharyngées

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Les émissions cutanées

• Elles proviennent de la perte de fragments de
  cellules épithéliales cutanées (desquamation)
• La différence de température entre le corps et la
  pièce crée des filets dair sur quelques
  centimètres
• Les mouvements du corps décollent les parties
  mortes de lépiderme et libèrent des particules
  de tailles différentes dans latmosphère
• Un homme perd 10 g de peau par jour en moyenne

74
Les émissions cutanées

• Cette émission de particules cutanées est
  notamment fonction de lactivité du personnel
• Une augmentation du nombre de particules émises
  par la peau peut aussi être mise en évidence par
  abrasion de la couche superficielle de la peau,
  par exemple par des vêtements trop ajustés ou
  après un brossage de lépiderme avec une méthode
  de lavage des mains non adaptée

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Les émissions cutanées

• Certaines de ces particules sont porteuses de
  microorganismes
• Les microorganismes trouvent à la surface de la
  peau les nutriments nécessaires à leur croissance
  (eau, sels minéraux, acides aminés, acides gras)
• A la surface de lépiderme souvrent des annexes
  (follicules pilo-sébacés, glandes sudoripares)
  dans lesquelles se trouvent des microorganismes
  dont léradication par les antiseptiques est
  assez difficile
• Malgré laseptisation des mains, la surface de la
  peau ne sera donc jamais exempte de germes, ce
  qui justifie lutilisation de paires de gants
  stériles

76
Les émissions rhinopharyngées

• Elles sont constituées de micro-gouttelettes de 5
  à 100 microns de diamètre (gouttelettes de
  Flügge)
• Ce sont des particules émises lors de la toux, de
  la parole et des éternuements
• Un simple éternuement entraîne la dissémination
  de 20.000 à 40.000 particules
• Une minute de conversation libère 20.000
  particules la lettre  D  équivaut à 30
  particules, la lettre  P  à 100 particules, la
  syllabe  PRE  à 180 particules

77
Les émissions rhinopharyngées

• Ces gouttelettes subissent une évolution qui
  dépend du degré hygrométrique et de la
  température de lair
• Les plus grosses se sédimentent rapidement mais
  les autres, en atmosphère sèche, se transforment
  en petit noyaux secs de 1 à 3 µm qui se déposent
  très lentement et peuvent être entraînées à de
  très grandes distances

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La flore dorigine intestinale

• Les microorganismes présents chez lhomme peuvent
  provenir de la flore dorigine intestinale
• Cette flore est souvent une source de
  contamination indirecte
• Elle est
• Soit manuportée chez les personnes ayant
  une mauvaise hygiène
• Soit libérée sous forme daérosols bactériens
  dorigine fécales lors de lutilisation de
  sanitaires ou de lavabos

79
Milieu

• Lair est un vecteur de microorganismes ayant
  pour origine soit lhomme, soit lenvironnement
  (origine tellurique, hydrique, )
• Deux origines de la biocontamination sont aussi
  évoquées, qui distinguent
• Une origine externe, par la flore des atmosphères
  libres
• Une origine interne due aux émissions par lhomme
  et ses activités, par la flore des atmosphères
  closes

80
Flore des atmosphères libres

• Lair qui entoure les locaux est un vecteur non
  négligeable de microorganismes en provenance du
  sol, des plantes, etc.
• Les variations qualitatives et quantitatives
  saisonnières, climatiques, géographiques sont
  certaines
• Il est noté aussi une variation de la flore
  rencontrée dans lair en espèces et en nombre
  selon lactivité sur le poste de travail et la
  température

81
Flore des atmosphères libres

• La flore urbaine se caractérise ainsi par une
  flore fongique monotone (Aspergillus,
  Penicillium, ) tandis que la flore rurale est
  très influencée par le type de sols et de
  cultures, et par les saisons (Alternaria,
  Cladosporium, )
• En général, le taux de spores fongiques est
  évolutif avec un maximum en août et un minimum en
  novembre décembre
• Le taux maximum de spores fongiques peut être
  évalué à 1.000 2.000 spores revivifiables par
  m3 dair
• Pour les bactéries, la flore urbaine se compose
  en général de 200 à 1.500 bactéries m3 dair

82
Flore des atmosphères closes

• Les origines de biocontamination sont soit
  humaines, soit non humaines par les matières
  (matières premières, fluides, etc.), le matériel,
  etc.
• Les espèces rencontrées ne sont pas uniformes

83
Moisissures fréquemment rencontrées dans un
environnement intérieur
84
Flore des atmosphères closes

• Les poussières sont de grosses particules de 10 à
  20 µm de diamètre, de nature minérale ou
  organique, dorigine très diverse fibres
  végétales, déchets tissulaires, poils, grains de
  pollen, etc.
• Selon leur compositions, elles peuvent favoriser
  la survie ou même la multiplication des
  microorganismes fixés
• Etant donné leurs dimensions, elles peuvent se
  maintenir en suspension en atmosphère calme et
  tendent à suivre une chute verticale jusquau
  niveau dun support solide
• En milieu ventilé, elles seront portées par les
  courants horizontaux, ascensionnels ou
  tourbillonnaires

85
Flore des atmosphères closes

• La persistance et la survie des microorganismes
  dans lair dépendent dun grand nombre de
  facteurs dont
• La température
• La taille des particules
• Le support
• Lhygrométrie
• La toxicité chimique de lair
• La toxicité des radiations
• Le type de microorganismes

86
Flore des atmosphères closes

• Le déplacement des particules biologiques peut
  aussi être soumis aux gradients
• De température (thermophérèse attraction, par
  une paroi froide, de particules se déplaçant sous
  laction dun gradient thermique)
• De lumière (photophorèse attraction de
  particules sous laction de la lumière)

87
Flore des atmosphères closes

• La présence de microorganismes dans latmosphère
  dépend des supports sur lesquels ils se posent

88
Les surfaces

• Ladhésion de microorganismes aux surfaces est,
  comme toute particules colloïdales, largement
  gouvernée par des interactions physico-chimiques
• Ces interactions non covalentes, dont la
  résultante peut être attractive ou répulsive,
  comprennent essentiellement les interactions
  électrostatiques, Lifshitz Van der Waals et
  acide base de Lewis
• Tous les facteurs susceptibles de modifier les
  propriétés physico-chimiques de surface dun des
  éléments du système (surface solide, fluide
  environnant ou microorganismes) peuvent favoriser
  ou, au contraire, limiter la fixation des
  microorganismes et donc la formation de biofilm

89
Matières

• Les matières regroupent les matières premières
  solides et les fluides, qui peuvent être à
  lorigine de diverses contaminations
• Les matières premières solides peuvent être
  utilisées, soit en tant que principe actif, soit
  en tant quexcipients
• Les fluides comprennent
• Leau eau de process, eau de lavage,
• Les gaz vapeur, air comprimé,
• Les liquides divers non considérés comme des
  matières premières

90
Leau

• Les installations de distribution deau peuvent
  être le siège de proliférations microbiennes dues
  
• A ladhésion des microorganismes sur des
  aspérités des canalisations
• A la présence de  bras morts  sur le circuit de
  distribution
• A des proliférations sur les sièges de joints
• A la multiplication microbienne dans des colonnes
  échangeuses dions, etc.

91
La vapeur

• Dans les industries de lultra propreté comme
  dans les industries pharmaceutiques, la vapeur
  est utilisée dans des procédés de stérilisation
  dinstallations ou de produits et pour
  lhumidification des ZAC
• La vapeur deau nest jamais stérile, étant
  produite et distribuée par une installation à
  partir deau dalimentation
• Les risques de contaminations peuvent provenir
  soit de la vapeur elle-même, soit de
  linstallation, soit des deux

92
Lair comprimé

• Lair comprimé peut être utilisé, par exemple,
  pour pressuriser les cuves et les autoclaves,
  pour le soufflage des ampoules bouteilles
• Lair comprimé peut aussi servir pour
  loxygénation des bactéries en fermentation, pour
  la production dozone, dazote in situ

93
Lair comprimé

• Lair comprimé utilisé dans des process de
  production peut être cause de contamination
  directe ou indirecte du produit fabriqué si sa
  qualité nest pas maîtrisée
• Des contaminants chimiques, des particules ou des
  microorganismes, peuvent altérer la qualité des
  gaz purs et ultra purs
• Lair comprimé est aussi chargé en humidité,
  susceptible de se condenser et ainsi de provoquer
  des corrosions et le développement de foyers
  microbiens

94
Matériels

• Le matériel peut aussi être source et vecteur de
  contamination
• Ce matériel concerne celui de production, de
  contrôle, de nettoyage, de maintenance, de
  communication, de sécurité, de transfert, etc.

95
Matériels

• La contamination du matériel peut être le
  résultat dopérations de production inadaptées
• Le matériel insuffisamment protégé (courant
  dair, humidité, eau stagnante, etc.) peut
  devenir une source importante de contamination
• La contamination peut aussi provenir dun défaut
  de nettoyage ou de décontamination de ces
  matériels
• Des contaminations peuvent survenir à cause de
  filtres HEPA défectueux
• Les circuits dair conditionnés peuvent aussi
  être contaminés
• Certains systèmes dhumidification, tours
  aéro-réfrigérantes, peuvent ainsi favoriser la
  formation daérosols biologiques

96
Méthodes

• Les méthodes, quelles soient de production, de
  maintenance, de nettoyage, de contrôle, de
  transfert, etc. peuvent être responsables de
  contaminations si elles ne sont pas adaptées,
  précises, et rigoureusement suivies

97
La maîtrise de la contamintion

• Moyens de maîtrise

98
La maîtrise de la contamintion

• Moyens de maîtrise
• Main duvre

99
Formation du personnel

• Elle fait partie intégrante de la mise en uvre
  des BPF
• Le personnel travaillant en ZAC doit être
  qualifié et formé aux domaines relatifs au risque
  microbiologiques
• Lhomme étant lune des sources de contamination
  les plus importantes dans lindustrie
  pharmaceutique, le nombre de personnes présentes
  dans les ZAC devra être réduit au strict minimum
• Dans la mesure du possible, les inspections et
  les contrôles devront seffectuer depuis
  lextérieur des ZAC

100
Hygiène

• Différentes règles sont à respecter dans
  les ZAC
• Avoir une hygiène personnelle stricte
• Signaler toute infection qui pourrait entraîner
  la dissémination de contaminants
• Effectuer des contrôles médicaux périodiques pour
  toute personne entrant en ZAC
• Exclure le port de bracelet, montre, maquillage
  et bijoux
• Effectuer un lavage soigné, fréquent et efficace
  des mains

101
Hygiène

• Porter des vêtements
• Spécialement conçus pour filtrer et limiter la
  contamination (particulaire et microbiologique)
  générée par la personne
• Nettoyés et manipulés de façon à ce quils ne se
  chargent pas de contaminants qui pourraient être
  libérés ultérieurement
• Adaptés, propres et stériles lors de chaque
  séance de travail
• Dont la qualité est adaptée aux fabrications et
  aux classements des zones de travail

102
Différentes tenues requises en zones classées
103
Comportements

• Adopter un bon comportement, cest
• Effectuer, pour lopérateur, des gestes
  méthodiques, utiles et posés
• Eviter toute conversation inutile en zone
• Ne pas consommer ou stocker de la nourriture, des
  liquides, etc.

104
La maîtrise de la contamintion

• Moyens de maîtrise
• Milieu

105
Le milieu

• Selon le guide de lultra-propreté, une ZAC peut
  être définie au niveau des locaux à laide de 3
  critères
• Existence dun espace délimité, en général une
  enceinte (espace fermé avec enveloppe spécifique)
• Accès à cet espace par un système de procédure
  dentrée et de sas pour les personnes, les
  matières et le matériel
• Existence dun système de traitement de lair
  avec filtration et maintien dune surpression ou
  dune dépression

106
Les cloisons

• Les cloisons des salles propres permettent de
  délimiter lenceinte propre et de participer
  ainsi à la maîtrise des conditions intérieures
• Les fonctions principales dune cloison de salle
  propre sont
• Assurer la séparation des locaux de manière à
  permettre lisolement des activités différentes
• Permettre la maîtrise des paramètres spécifiques
  de température, dhygrométrie, dacoustique,
  déclairage, etc.
• Limiter les risques de diffusion de produits
  toxiques
• Contribuer à lamélioration du cadre de travail
  par le choix des coloris et des matériaux
• Participer à la sécurité en permettant un
  balisage et un repérage facile des circuits
  dévacuation
• Participer au respect des impératifs dhygiène et
  de normes propres à la production

107
Les cloisons

• Les cloisons doivent avoir les caractéristiques
  suivantes
• Robustesse
• Parois lisses et sans anfractuosités
• Etanchéité
• Eventuellement démontables
• Ne relarguant pas de particules
• Dentretien aisé y compris au niveau des portes
  et des vitres
• Une cloison de salle propre est très technique et
  impose une mise en uvre de très grande qualité
  par un personnel hautement qualifié et habitué à
  un travail de finition irréprochable

108
Les sols

• Les sols des salles propres devront être
• Robustes
• Lisses et sans joint, mais non dérapants
• Dun entretien aisé
• De très faible usure, permettant lusage répété
  de produits de nettoyage et de décontamination
• Résistants aux trafics, aux charges et aux types
  de roues des moyens de manutention
• En fonction des secteurs dactivité, les
  matériaux les plus utilisés sont
• La résine époxy
• Les linoléums de type  mypolan 

109
Les plafonds

• Pour la fabrication de médicaments stériles, les
  faux plafonds doivent être scellés pour éviter
  les contaminations provenant de lespace
  supérieur
• Les matériaux utilisés pour les plafonds doivent
  être
• Etanches
• Robustes
• Non relarguants
• Nettoyables
• Démontables
• On trouvera ainsi souvent des panneaux à parement
  métalliques, présentant lavantage dêtre
  facilement nettoyables à grande eau et de
  résister à la désinfection par des produits
  chimiques

110
Les plafonds

• Les luminaires et les filtres absolus seront, de
  préférence, encastrables dans le plafond pour un
  nettoyage aisé et efficace, et pour assurer un
  meilleur écoulement de lair dans la salle

111
Les sols et les plafonds

• Il est préférable que les angles entre le sol et
  les cloisons et entre les cloisons et le plafond
  soient arrondis
• Cela permet un nettoyage plus aisé et plus
  efficace et évite une accumulation des germes

112
Canalisations

• Selon les BPF, les canalisations et les gaines
  doivent être installées de façon à ne pas créer
  des recoins et des surfaces difficiles à nettoyer
• Les éviers et les canalisations dévacuation
  doivent être exclus des zones de classe A / B
  utilisées pour des fabrications aseptiques
• Dans les autres zones, des systèmes anti-retours
  doivent être installés entre les machines ou les
  éviers et les canalisations
• Les évacuations au sol des ZAC de classe
  inférieure doivent être équipées de siphons ou de
  gardes deau pour éviter tout reflux

113
Les portes

• Selon les BPF concernant la fabrication des
  médicaments stériles, les portes doivent être
  dun modèle ne présentant pas danfractuosités
  difficiles à nettoyer (? les portes coulissantes
  ne sont pas recommandées)
• Par exemple, les accessoires (paumelle, ferme
  porte, etc.) seront de préférence en saillie,
  bien carrossés, facilement nettoyables, plutôt
  quencastrés laissant des ouvertures non
  contrôlées et non décontaminables

114
Les portes

• Le choix dune porte étanche portera sur les
  critères suivants
• Les matériaux de fabrication huisserie,
  vantail, joints détanchéité
• Lapparence mono- ou bi-affleurante, standard
• Létanchéité
• Porte à joint statique coulissante ou non (classe
  100 à 100 000) à plinthe automatique
• Porte à joint gonflable coulissante ou non
  (classe 1 à 100)
• Le pouvoir disolation isothermique,
  isophonique, résistante au feu, etc.

115
Les éléments vitrés

• Ils doivent correspondre aux critères des
  éléments de cloisons (étanchéité, nettoyage et
  décontamination, sans relargage et sans
  rétention)
• Ils sont de plus en plus souvent composés
  déléments monoblocs étanches
• Les fenêtres sont de préférence fixes et
  affleurantes aux murs

116
Lélectricité

• Les luminaires seront de préférence affleurants
  et démontables par les combles
• De préférence, les prises de courants, prises
  téléphoniques et informatiques seront encastrées
  et étanches, et les commutateurs électriques
  seront de préférence situés à lextérieur des
  salles

117
Les sas matériels et personnels

• Les sas matériels et personnels permettent, de
  par la création dune zone tampon entre le
  couloir et la première salle classée, le maintien
  de la zone de pression
• Les sas doivent être conçus et utilisés de telle
  façon que les différentes phase dhabillage
  soient fractionnées les contaminations
  particulaires et microbiologiques pourront ainsi
  être diminuées
• Les sas doivent être ventilés avec de lair filtré

118
Les sas matériels et personnels

• Selon les BPF, la dernière partie du sas doit
  relever, au repos, de la même classe que la zone
  à laquelle il mène
• Lutilisation de vestiaires distincts pour
  lentrée et la sortie des ZAC est parfois
  préférable
• De manière générale, les lave-mains ne peuvent
  être installés que dans la première partie des
  vestiaires

119
Les flux

• Le circuit de chaque flux doit être étudié
  dabord séparément pour éviter les croisements à
  risques et les retours en arrière
• On distingue 3 types de flux
• Flux de matières principe actifs, excipients,
  articles de conditionnement, produits en cours,
  produits finis, déchets, vêtements, fluides,
  matériels, etc.
• Flux de personnel direction, production,
  contrôle, entretien, nettoyage, décontamination,
  sécurité, visiteurs, etc.
• Flux de documents
• La fixation définitive des circuits doit être
  revue avec lagencement de lensemble
• La circulation des flux doit se faire avec une
  logique détapes croissantes de qualité ou de
  propreté et avec la mise en place de sas
  intermédiaires

120
La maîtrise de la contamintion

• Moyens de maîtrise
• Matières

121
Traitement de lair

• Les systèmes de traitement de lair sont destinés
  à protéger les zones de production classées (A,
  B, C ou D) des contaminations extérieures et de
  celles liées à lactivité à lintérieur de la
  zone
• Le système aéraulique à mettre en uvre pour
  obtenir le niveau de propreté et denvironnement
  requis pour la fabrication de produits relevant
  du domaine de la santé, est défini par 5 critères
  
• La filtration de lair
• La diffusion de lair
• Les surpressions ou dépressions
• Le taux de brassage
• Le contrôle des conditions physiques de lair

122
La filtration de lair

• La filtration de lair a pour objet
• Préserver la salle propre de la contamination
  apportée par lair neuf
• Eliminer la génération des contaminants
  intérieurs process, produits, équipements,
  personnel
• Préserver la qualité de lair rejeté

123
Famille de filtres

• Trois grandes familles de filtres se
  différencient
• Les filtres gravimétriques
• Les filtres opacimétriques
• Les filtres fins et ultra-fins

124
Les filtres gravimétriques

• Fibres de verre ou synthétiques (acrylique), de
  diamètre entre 30 et 50 µm, avec intervalle entre
  les fibre de 200 à 400 µm
• Filtres grossiers ou pré-filtres, montés en amont
  des filtres fins lorsque lenvironnement
  extérieur est très pollué
• Ils permettent le maintien des performances de
  linstallation en évitant lencrassement des
  centrales de traitement dair en retenant la
  majorité des particules de lair

125
Les filtres opacimétriques

• En papier de fibre de verre
• Filtres fins, ils sont utilisés au niveau des
  centrales de traitement de lair
• Ils protègent les filtres à Très Haute Efficacité
  (THE)

126
Les filtres fins et ultra-fins

• Fibres minérales mélangées soit à de la
  cellulose, soit à des fibres de verre, dun
  diamètre de 1 à 10 µm, espacées de 10 µm
• Filtres THE, ils comprennent
• Les filtres High Efficiency Particulate Air
  (HEPA) ou filtres  absolus  ces filtres
  permettent lélimination des microparticules, des
  microorganismes, voire des virus
• Les filtres Ultra Low Penetration Air (ULPA)
  encore plus performant que les filtres HEPA, ils
  permettent lélimination de particules de taille
  inférieure à 0,3 µm

127
La diffusion de lair

• Elle permet la captation et lévacuation des
  contaminants internes
• Deux techniques de diffusion sont utilisées
• Le régime turbulent
• Le régime laminaire

128
Le régime turbulent

• Pour classes ISO 9 à 6
• Cest un mouvement multidirectionnel (dilution de
  la contamination)
• Les lignes nétant pas canalisées, une
  contamination peut se retrouver en nimporte quel
  point du local et être ramenée à tout moment vers
  les zones sensibles
• Il y a donc variabilité de la contamination dans
  lespace

129
Le régime laminaire

• Pour classes ISO ? 5
• Cest un mouvement unidirectionnel (diffusion par
  captation linéaire)
• Cette diffusion se fait au travers de flux
  unidirectionnels verticaux ou horizontaux
  diffusant une veine dair au travers de filtres
  absolus
• Les turbulences sont alors réduites si les
  obstacles sont fractionnés

130
Les surpressions ou dépressions

• Selon les BPF concernant la fabrication des
  médicaments stériles, une alimentation en air
  filtré doit maintenir en toutes circonstances,
  pendant la fabrication, une pression positive et
  une circulation dair par rapport aux zones
  voisines de classe inférieure et balayer
  efficacement la zone

131
Le taux de brassage

• Le taux de brassage se définit par la formule
  suivante ( en V / h)
• Débit dair soufflé (en m3 / h)
• --------------------------------------
• Volume de lenceinte (en m3)
• Le taux de renouvellement correspond à la formule
  suivante (en V / h)
• Débit dair neuf
• ----------------------------
• Volume de lenceinte
• Le taux de renouvellement doit être au minimum de
  25 m3 / h

132
Taux de brassage selon les classes
dempoussièrement
133
Le contrôle des conditions physiques de lair

• Le traitement de lair devra assurer le maintien
  en température et en humidité de lambiance en
  compensant
• Les apports ou déperditions des parois
• Les apports de chaleur sensible et / ou latente
  (occupants, process, équipements, éclairage,
  autoclaves, etc.)
• Les apports ou déperditions des conditions
  physiques de lair extérieur (température et
  hygrométrie)

134
Lair comprimé

• La propreté microbiologique de lair comprimé
  peut être favorisée par les chambres de
  compression où il est possible datteindre des
  températures élevées (170 C)
• Il est possible déliminer lhumidité en
  déshydratant lair comprimé avec des sécheurs par
  réfrigération ou par adsorption

135
Leau

• Leau peut être utilisée comme agent externe sans
  aucun contact avec le produit ou comme élément de
  fabrication proprement dit
• Leau est lexcipient ou le véhicule le plus
  utilisé en pharmacie
• En industrie pharmaceutique, on distingue
  différents types deau
• Eau potable
• Eau purifiée
• Eau hautement purifiée
• Eau pour préparation injectables (eau ppi)

136
Leau potable

• Elle contient des éléments indésirables
  différents suivant son origine et ne convient
  donc pas en létat pour des applications où leau
  pure ou ultra-pure est nécessaire
• Cependant, comme leau potable sert de base à la
  fabrication des autres eaux, la qualité de la
  source en eau potable doit être suivie et
  contrôlée régulièrement

137
Leau purifiée et hautement purifiée

• Elles sont produites à partir deau potable et
  utilisées pour la fabrication de principes
  actifs, de formes sèches, comme excipient de
  produits liquides non stériles non apyrogènes
  (eau purifiée) ou apyrogènes non injectables (eau
  hautement purifiée), et comme solution de
  nettoyage et de rinçage du matériel en
  préparation
• Nombre dUFC toléré par la Pharmacopée Européenne
  
• Eau purifiée ? 100 UFC / ml
• Eau hautement purifiée ? 10 UFC / ml

138
Eau ppi

• Elle est un des composants essentiels des formes
  pharmaceutiques destinées à la préparation de
  médicaments pour administration parentérale
• Elle sert également comme eau de rinçage ou de
  process

139
Les matières solides

• Toute matière première ne doit être achetée
  quauprès de fournisseurs agréés par lindustrie
• A chaque réception, lintégrité des emballages ou
  des récipients doit être contrôlée, ainsi que
  leur fermeture et la correspondance entre le bon
  de livraison et létiquette du fournisseur
• La nature de chaque substance délivrée, ainsi que
  son poids ou son volume, doit être vérifiée et la
  vérification notée
• Les matières premières stockées doivent être
  correctement étiquetées
• Seules peuvent être utilisées en fabrication les
  matières premières qui ont été libérées par le
  Département Contrôle Qualité et qui sont en cours
  de validité

140
La maîtrise de la contamintion

• Moyens de maîtrise
• Matériels

141
Matériel

• Daprès les BPF,  lensemble du matériel, y
  compris les stérilisateurs, les systèmes de
  conditionnement et de filtration de lair, les
  filtres à gaz, les systèmes de traitement, de
  production, de stockage et de distribution de
  leau, doit être validé et entretenu de façon
  planifiée. Dans la mesure du possible, le
  matériel, les appareils et les installations
  techniques doivent être conçus et installés afin
  de permettre que les interventions, lentretien
  et les réparations puissent être effectués de
  lextérieur de la ZAC. 

142
Validation

• La validation établit la preuve que la mise en
  uvre et lutilisation de processus, procédés,
  matières, matériel, produits et articles de
  conditionnement permettent réellement datteindre
  les résultats escomptés
• Elle garantit la fiabilité et la reproductibilité
  des procédés

143
Maintenance

• La maintenance peut être définie comme
   lensemble des activités techniques,
  administratives et de management, destinées à
  maintenir ou à rétablir une installation dans un
  état ou des conditions données de sûreté de
  fonctionnement pour accomplir une fonction
  requise. 

144
Maintenance

• On distingue 2 grands types de maintenance
• La maintenance préventive, qui permet de réduire
  la probabilité de défaillance ou de dégradation
  dune installation
• La maintenance corrective, qui consiste, après
  défaillance à remettre temporairement ou
  définitivement linstallation en état de
  fonctionnement

145
La maîtrise de la contamintion

• Moyens de maîtrise
• Méthodes

146
Organisation générale

• Maîtriser la contamination passe aussi par des
  méthodes adéquates et donc par un système
  dAssurance Qualité conçu avec une documentation
  rigoureusement gérée

147
Nettoyage - désinfection - stérilisation

• Le nettoyage, la désinfection et / ou la
  stérilisation des équipements et des locaux font
  partie des opérations déterminantes dans le
  processus de production et danalyse dun produit
  pharmaceutique, notamment pour les médicaments
  injectables

148
Contexte réglementaire

• Le contexte réglementaire du nettoyage et de la
  désinfection est défini dans différents
  référentiels
• Français BPF
• Européens directives 98/8/CEE (produits
  biocides), 91/356/CEE (médicaments à usage
  humain), 91/412/CEE (médicaments vétérinaires,
  etc.
• Américains cGMP, 21 CFR 211-56 et 67
• Internationaux ISO / DIS 14698-1, 2 et 3
• Auxquels sajoutent de nombreuses recommandations
  revue STP Pharma Pratiques, guide ASPEC, etc.

149
Démarche

• Différents matériels peuvent être utilisés
  tissus dessuyage non tissés stériles ou non,
  autolaveuses, monobrosses, aspirateurs et balais,
  etc.
• Différentes opérations de nettoyage peuvent être
  distinguées balayage humide, essuyage humide,
  immersion, aspersion, nettoyage à mousse ou à
  ultrasons, nettoyage en place

150
Démarche

• Chaque industrie doit faire choisir et qualifier
  les produits de nettoyage et de désinfection en
  fonction de ses activités, et respecter
  lalternance de produits de classes différentes
• Lefficacité se détermine par des méthodes de
  prélèvements (écouvillonnage, boîte de gélose
  contact, lames gélosées, etc.) et de contrôle
  physico-chimiques ou microbiologiques appropriés

151
Démarche

• Enfin, la démarche de nettoyage et de
  désinfection doit être validée, notamment en
  terme de logique et de réalisme

152
La maîtrise de la contamintion

• Causes possibles de contamination

153
La maîtrise de la contamintion

• Causes possibles de contamination
• Hiérarchie des causes

154
Causes possibles de contamination

• En cas de contamination fongique, il faut
  rechercher les causes possibles de la présence de
  moisissures dans lenvironnement des ZAC et
  analyser les causes en étudiant le caractère
  vraisemblable de chaque cause potentielle

155
Hiérarchie des causes

• Pour étudier le caractère vraisemblable de chaque
  cause potentielle, et ainsi trier et hiérarchiser
  ces causes, il est possible de leur attribuer une
  cotation (de 1 à 4) traduisant lappréciation
  portée sur chaque hypothèse de disfonctionnement
  formulée et dévaluer les écarts par rapport à
  des situations antérieures maîtrisées

156
Note 1

• La cause est inapplicable dans le contexte ou
  elle est sans effet sur le paramètre ayant dérivé

157
Note 2

• Il y a peu de probabilité que cette cause soit à
  lorigine du problème
• Ce type de disfonctionnement a peu dimpact sur
  le paramètre ayant dérivé

158
Note 3

• La cause est possible
• Elle peut être à lorigine du problème même si on
  ne la jamais observé auparavant
• La cause peut avoir une influence moyenne sur le
  paramètre en cause

159
Note 4

• La cause est probable
• Elle est vraisemblable dans le contexte
• Ce type de disfonctionnement peut avoir une forte
  influence sur le paramètre en cause
• Le phénomène sest déjà produit

160
La maîtrise de la contamintion

• Causes possibles de contamination
• Main duvre, milieu, matières / matériels,
  méthodes

161
Main doeuvre
162
Milieu
163
Matières / matériels
164
Méthodes
165
La maîtrise de la contamination

• Actions correctives et / ou préventives

166
Actions correctives et/ou préventives

• Après avoir déterminé les causes possibles, voire
  probables, de la présence de moisissures en ZAC,
  il faut proposer des actions correctives et / ou
  préventives

167
Exemples au niveau des méthodes

• Les procédures dentrée et de sortie du matériel,
  des matières et du personnel, tout comme les
  procédures de nettoyage et désinfection, peuvent
  être illustrées par des images percutantes et
  être affichées en ZAC de façon à ce quelles
  stimulent la mémoire visuelle des opérateurs

168
Exemples au niveau des méthodes

• Au niveau du suivi environnemental, il peut être
  intéressant deffectuer des prélèvements de lair
  extérieur afin de pouvoir corréler les données de
  biocontamination du milieu intérieur avec celles
  de lextérieur, et ainsi déterminer si lorigine
  de la biocontamination nest pas issue de
  lenvironnement immédiat

169
Exemples au niveau des méthodes

• Concernant le nettoyage et la désinfection, il
  peut être judicieux détudier le phénomène de
  résistance des microorganismes et, selon les
  résultats, denvisager lalternance avec dautres
  types de produits

170
Plan

• Les zones datmosphère contrôlée
• Définition
• Normes et contexte réglementaire
• Normes ISO 14644 et 14698
• Autres normes ISO 13408, BPF
• La maîtrise de la contamination