Presentazione di PowerPoint

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Punti Critici
Risospendere il pellet nel medium di
congelamento rapidamente ed in ghiaccio

• Il congelamento e lo scongelamento non migliorano
  lo status quo delle cellule
• Gli agenti crioprotettivi possono essere
  Dimetilsulfossido (DMSO) o Glicerolo proteggono
  le cellule dai danni indotti dalla formazione dei
  cristalli di ghiaccio durante il criocongelamento
• La lunga esposizione a temperatura ambiente al
  DMSO può danneggiare irreversibilmente le cellule
• Non è necessario sterilizzare il DMSO poiché in
  forma pura è letale per i batteri

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Punti Critici
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Punti Critici
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Contenitori Nalgene
Isopropanolo
Immediato trasferimento delle criovials a -80C
per almeno 4 ore
Trasferimento in Tanica Criogenica Fase di Vapori
di Azoto Liquido
Trasferimento in Tanica Criogenica Fase Liquida
di Azoto
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BANCA del CORDONE OMBELICALE
Che cosa è un Cordone Ombelicale?
Perché si costituiscono le Banche di Cordone
Ombelicale?
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Cord Blood
Contiene cellule staminali che si autorinnovano,
mantenendo il pool delle cellule staminali
stesse, e cellule progenitrici più mature. Il
numero totale di queste cellule è maggiore
rispetto a quello presente nel midollo adulto.
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Classificazione delle Cellule Staminali

• TOTIPOTENTI
• PLURIPOTENTI
• MULTIPOTENTI
• OLIGOPOTENTI
• UNIPOTENTI

Wagers e Weissman Cell, Vol 116, pp 639-648, 2004
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Cellule Staminali Multipotenti
Esse sono in grado di dare origine ad un subset
of cell lineages
A tuttoggi le cellule staminali ematopoietiche
multipotenti sono quelle più studiate e
caratterizzate sia biologicamente che
funzionalmente.
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CD34
C-kit
CD90
Flt3 -Flk2
CD133
HLA-DR-

• Il CD90, il CD133 ed il CD34 sono antigeni della
  cellula staminale
• Il CD90 è possibilmente coinvolto nelle
  interazioni cellula-cellula
• Il CD133 è una proteina Prominin-like
• Il C-kit o CD117 è il recettore per il fattore di
  crescita Stem Cell Factor
• Flt3-Flk2 o CD135 è il recettore per Flt3 ligand
  ad attività tirosin-chinasica.

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M. Goodell 2001
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ABC transporters involved in drug
resistance Gene Protein/alias Drug
effluxed ABCA2 ABCA2 Doxo, VP16,
vinblastine ABCB1 MDR1 Colchi, doxo,
VP16 ABCC1 MRP1 Doxo, dauno, vincristine ABCC2
MRP2 Vinblastine, cisplatinum ABCC3 MRP3 MTX,
VP16 ABCC4 MRP4 6-MP, 6-TG ABCC5 MRP5 6-MP,
6-TG ABCC6 MRP6 VP16 ABCC11 MRP8 5-FU ABCG2 C
Dw338 Mitoxantrone, imatinib, Hoechst
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Dean, 2005
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Inizio della Fase di Congelamento

• Addizionare la soluzione crioprotettiva alla
  sospensione cellulare cordonale avendo cura di
  lavorare in ghiaccio
• Preparazione delle aliquote di sangue cordonale
  già diluito in soluzione criopreotettiva
• Preparazione delle aliquote-pilota per potere
  eseguire test di controllo
• Avviare la vera e propria fase di congelamento.

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Unintelligente strategia biologica è quella di
inserire una sequenza di molecole funzionalmente
interdipendenti nella compagine di un tratto di
membrana plasmatica o intracellulare questa,
quindi, può offrire, nel caso del complesso
multienzimatico, la struttura di supporto
richiesta per la sua integrazione funzionale.
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