Animal-Mod

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Animal-Modèles AnimauxetProduits Animaux

• JOURNEE de la RECHERCHE
• 07 MAI-2009

Claire Gaiani, Yves Le Roux
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Entretiens Lipidomix T. Pillot LSGC I.
Chevalot, J.L. Goergen, A. Marc URAFPA C.
Feidt, G. Rychen LAE B. Amiaud, F. Bourgaud LSE
J. Cortet, C. Schwartz LIBIO C. Sanchez, M.
Linder, E. Arab Tehrany
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• Plusieurs Laboratoires, pour plusieurs
  problématiques
• BioProcédés
• LSGC
• Valorisation des co-produits et structuration
  moléculaire
• LIBIO
• Fonctionnalité de Molécules (positive ou
  négative)
• URAFPA/LIBIO/LIPIDOMIX/LSGC
• Prévention pathologies neurodégénératives
• LIPIDOMIX
• Pratiques Agricoles et Biodiversité
• LSE/LAE

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Quels Outils ?

• Cellules, Tissus dorigine animale
• In vitro
• cultures cellulaires primaires, lignées
• Cérébrale, intestinales, adipeuse, mammaire
• VERO, CHO, Cellules Souches
• Ex vivo (tissus, organes)
• Intestinale
• Animal
• Modèles pour lhomme
• porc, rat, souris
• Animaux de rentes
• lait, viande, œuf (bovin, caprins, avins,
  poissons)
• Animaux Marqueur de biodiversite ou
  bioindicateurs de pollution des sols (nématodes,
  collemboles)
• Produits Animaux
• - Lait, produits de la mer, viande

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BIOPROCEDES(LSGC)
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BioProcédés
Production de molécules par des cellules
animales Effet des conditions de milieu et de
culture - Interferon effet sur le niveau de
glycosylation (CHO) Ingénierie
tissulaire - Régénération de ligament
7
(No Transcript)
8
(No Transcript)
9
Chaîne Polypeptidique
Chaînes Glycanniques
Produits protéines glycosylées actives et non
immunogènes
Catalyseurs cellules génétiquement améliorées
Procédé de production
cuves agités réacteurs membranaires fermés,
continus, perfusés milieux réactionnels
(milieux de culture) complexes
Interféron E.P.O. anticorps
C.H.O. hybridomes VERO
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Etude de la glycosylation dune protéine à usage
thérapeutique, IFN-?, au cours des cultures de
cellules CHO
IFN-g 2N
IFN-g 1N
IFN-g 0N
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DEMARCHE EXPERIMENTALE
CELLULES CHO
CARACTERISATION DE LA GLYCOSYLATION DE LIFN-g
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Impact des peptides sur la croissance de
cellules eucaryotes (CHO-IFN)
Référence
Alcalase à 4 g/l
T0
Suivi par analyse dimages Système non invasif et
micro-échelle
T96h
T240h
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Valorisation des co-produits et structuration
moléculaire (LIBIO)
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Valorisation des co-produits et Structuration
moléculaire
15
Valorisation des co-produits et Structuration
moléculaire
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Valorisation des co-produits et Structuration
moléculaire
17
Valorisation des co-produits et Structuration
moléculaire
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Fonctionnalité de Molécules (positive ou
négative) (URAFPA/LIPIDOMIX/LIBIO/LSGC)
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Fonctionnalité capacité dune molécule à
intervenir sur les fonctions de lorganisme, pour
en moduler lactivité
Bioaccessibilité capacité à se rendre
disponible (si aliment absorption intestinale
métaux, antioxydant) Biodisponibilité
fraction dune molécule atteint sa cible (via la
circulation sanguine ou non pour aller vers sa
cible, peptides, lipides) Bioefficacité
(toxicité) mesure in vivo dune activité
biologique
Echelle dapproche Cellule/Organes/Animal
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Démonstration de lactivité biologique
Activité anxiolytique a-Casozépine (peptide du
lait)
165 s 135 s
Labyrinthe en Croix Surélevé (LCS)
50 s 60 s
TEMPS PASSE EN BRANCHE OUVERTE (S)
N15 Plt0,05
1 mg/kg 0,79 µmol/kg
0,7 mg/kg 0,79 µmol/kg
1 mg/kg
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BARRIERES PHYSIQUES et ENZYMATIQUE
Estomac- Suc gastrique
Pancréas- Suc pancréatique
Intestin grêle- Epithélium intestinal
Peptidases membranaires de la bordure en brosse
Hémato-encéphalique
Bioefficacité de a-Casozépine Mécanisme
daction ?
Ojectifs du travail
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Modèles de biodisponibilité intestinale
- Lipides, peptides, mélanges nanostructurés,
Polluants
Caco-2
Chambre de Ussing
Apical
basal
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Modifications des propriétés de molécules
bioactives (Acylation, Vectorisation)
Résistance à lhydrolyse ? Augmentation du
Transfert ?
Biodisponibilité
Acylation
Influence du milieu
Lys-Ser
Faible réactivité
O
NH
H2N
CH
C
CHIMIOSELECTIVITE
CH
COOH
(CH2)4
CH2
N-acylation
NH2
OH
EFFICACITE
O-acylation
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Sécurité sanitaire des aliments
Sites et sols pollués
EVALUATION RISQUE
Site soumis à autorisation
Produits animaux
Modalités délevage
Exposition
Caractérisation
Scénarios prédictifs
GESTION RISQUE
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Résultats In Vivo Pour le Plomb
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Dose-Réponse
Dose-réponse pour le plomb pour différents sols
cas du rein
Pb dans le rein µg/kg DM
Dose (µgPb/KgBW/day)
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Facteurs de transfert déterminés après
consommation de foin dAlbertville par 3 chèvres
en lactation pendant 72 j
Concentration dans le lait de congénères PCDD
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BIOMARQUEURS-BIOINDICATEURS (LSE)
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Utiliser la faune du sol pour évaluer la
restauration des sols contaminés
Utilisation des Nématodes pour caractériser
lévolution de sols anciennement contaminés par
une cokerie
Terre Désorbée
Terre Nue
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Domaine Expérimental de la Bouzule 100 VL
(robot de traite) 40 places en ingestion
individuelle Vaches Fistulées Etang et station
aquacole (12 bassins)
Animalerie ENSAIA/URAFPA
12 places individuelles porc 48 places
individuelles poules 6 places individuelles
caprins/ovins
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Prévention des pathologies neurodégénératives (LIP
IDOMIX)
Approche préventive/curative - Nutritionnelle
Métabolisme lipidique - Médicamenteux
Injection de Lipide endogène - Thérapie
cellulaire Injection de cellules
productrices de neurotrophine
Echelle dapproche Cellule/Animal Pas de test
clinique
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Neuroprotection par des lipides le
DHA (docosahexaenoic acid)
CTRL
p lt 0.001
100
80
Cell viability ( of control)
60
Aß
40
20
DHA Aß
0
DHA (nM)
5
0
0
Aß
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Démonstration In vivo
Amélioration de la mémoire court terme
Amélioration de la mémoire long terme
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QUELLES INTERACTIONS ENTRE LES PROBLEMATIQUES ???
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Conditions de milieu
BioProcédés
Valorisation Co-produits Structuration
moléculaires
Production de molécules dintérêt
Interféron g , vaccin, ligament

• Vectorisation de molécules
• - Greffage (acylation)
• Encapsulation
• Mélange nanostructuré

Toxicité, Criblage (Colza, extrait Levure)
Cellules Organes Organismes
Produits animaux

• Prévention maladie
• Neurodégénérative
• Nutritionnelle
• Médicamenteuse
• Thérapie cellulaire

Fonctionnalité positive Peptides anxiolytiques,
lipides, flavonoïdes
Fonctionnalité Négative
Périphérique, cérébral
Transfert Biodisponibilité Bioaccessibilité
Chaîne alimentaire HAP, PCB, ETM, Dioxine,
Pesticide
Mécanisme daction
Neurotoxicité
Bioefficacité démontrée
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QUELLES INTERACTIONS ENTRE LES LABORATOIRES ???
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Structure molécules
BioProcédés
Prévention
LSGC
LIBIO
LIPIDOMIX
Vectorisation
Fonctionnalité
URAFPA
Fonctionnalité -
Biodisponibilité Toxicité
Biodiversité
Bioindicateurs
LAE
LSE