AFLP

1
AFLP

• Polimorfizm dlugosci amplifikowanych fragmentów

Justyna Wieczorek Piotr Szumilo Filip Poszumski
2
Charakterystyka AFLP

• Polimorfizm dlugosci amplifikowanych fragmentów
  (AFLP) jest metoda umozliwiajaca fingerprinting
  DNA, która laczy zalety PCR i RFLP.
• Wymaga bardzo malej ilosci wyjsciowego DNA i
  polega na badaniu obecnosci lub braku
  amplifikacji specyficznych fragmentów
  restrykcyjnych, podczas gdy w metodzie RFLP
  porównujemy dlugosc specyficznych fragmentów
  restrykcyjnych.
• Laczy trawienie enzymami restrykcyjnymi z reakcja
  PCR.

3
Przebieg metody

1. Pierwszy etap AFLP polega na trawieniu
   oczyszczonego DNA dwoma enzymami restrykcyjnymi
2. Nastepnie do otrzymanych fragmentów przylaczane
   sa adaptory o dlugosci 20-30 nukleotydów
3. Po ligacji adaptorów prowadzona jest reakcja
   preamplifikacji. Przylaczaja sie startery
   preselekcyjne, komplementarne do adaptora,
   miejsca restrykcyjnego, oraz posiadajace na koncu
   3 jeden nuleotyd selektywny
4. Po amplifikacji niespecyficznej przeprowadza sie
   amplifikacje specyficzna startery posiadaja 2-4
   specyficzne nukleotydy
5. Rozdzial produktu nastepuje na zelu
   poliakrylamidowym. Detekcja prazków odbywa sie
   przez barwienie srebrem badz autoradiograficznie,
   jesli wczesniej uzyto znakowane radioaktywnie
   adaptory

4
Schemat metody
5
Odczytywanie wyników
6
Zalety i wady metody

• Do zalet nalezy zaliczyc mozliwosc analizy wielu
  segregujacych loci na jednym autoradiogramie. Ze
  wzgledu na duza rozdzielczosc i wiarygodnosc,
  AFLP jest wykorzystywany do identyfikacji odmian
  hodowlanych.
• Zaleta jest równiez krótki czas analiz

• Duze doswiadczenie i umiejetnosc analizy wyników
  mozna zaliczyc do wad metody.

7
Bibliografia

• Biotechnologia roslin pod red. Stefana
  Malepszego, PWN 2001
• Przykladay analiz DNA pod red. Ryszarda
  Slomskiego,
• AR w Poznaniu 2004
• www.racjonalista.pl