SEPARACIN DE CLULAS MONONUCLEARES

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SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES
1065. Inmunología AplicadaEnseñanza Experimental
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SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTE
Estratificar 5 mL sangre 3 mL Ficoll-Hypaque
Diluir 12 con BSS
Toma de muestra 5 mL sangre con heparina
Centrifugar a 1500 rpm x 45 min
3
Conteo celular en cámara de Neubauer
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ROSETAS E
40X
Adicionar 3 mL de BSS a las células mononucleares
Ajustar concentración a 4x106 cel/mL
Lavar a 1500 rpm x 10min X 3 veces
Hacer dilución 190mL azul tripano 10 mL
susp,células
Resuspender en 0.5 mL de BSS
GRC
0.25 mL de susp. 0.25 mL GRC 1
Incubar a 37C durante 15 minutos
Centrifugar a 500 rpm x 3min
Mantener a 4C durante 1 hora
Realizar la lectura a 40X
5
(No Transcript)