Citometria de fluxo

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Citometria de fluxo
Faculdade de Medicina da Universidade Federal da
Bahia

• Com material obtido em parte da
• Purdue University Cytometry Laboratories
• (http//www.cyto.purdue.edu/flowcyt/educate/pptsli
  de.htm)
• Agradecimentos
• Dr. Robert Murphy, Carnegie Mellon University,
  Pittsburgh, PA
• Dr. J. Paul Robinson, Purdue University Cytometry
  Laboratories
• Dr. Carleton Stewart,RPCI Laboratory of Flow
  Cytometry, Buffalo,NY
• B. H. Davis, William Beaumont Hospital, Royal
  Oak, Michigan

2
O que é a citometria de fluxo
3
Avaliação de sub-populações celulares quadrantes
CD4 e CD8.
1
2
45
2
100
Log PE Fluorescence (CD4)
10
1
3
4
27
26
.1
.1
1
10
100
1000
Log FITC Fluorescence (CD8)
4
Avaliação de ativação celular explosão
respiratória.
DCFH-DA
DCFH-DA
DCFH
H O
2 2
5
Análise de divisão celular.
M
G0
G2
DNA Analysis
G1
s
Count
s
0
200
400
600
800
1000
DNA content
6
Análise de DNA
300
225
150
Counts
75
0
0
200
400
600
800
1000
4N
2N
PI Fluorescence
7
Influxo de cálcio
8
Análise de reticulócitos
RMI 34
RMI 0
R1
R2
R3
R4
R3
R1
R2
R4
1000
1000
.1
100
1
10
1
10
100
.1
log Thiazole Orange
log Thiazole Orange
9
Citômetro de fluxo
Detector Mechanical
Computer System
Fluidics
10
Célula de Fluxo
11
90 Degree Light Scatter
12
Detectores de fluorescência
13
Marcadores fluorescentes
14
Cromógenos
Common Laser Lines
PE-TR Conj.
Texas Red
PI
Ethidium
PE
FITC
cis-Parinaric acid
15
Imunofenotipagem marcação celular
CD2
CD4
16
Imunofenotipagem
1000
100
10
1
.1
Log FITC
17
Light scatter gating
Side Scatter Projection
Neutrophils
Scale
1000
200
100
50
40
Monocytes
30
20
15
Lymphocytes
8
200
400
600
800
1000
0
90 Degree Scatter
18
Avaliação de sub-populações celulares quadrantes
CD4 e CD8.
1
2
45
2
100
Log PE Fluorescence (CD4)
10
1
3
4
27
26
.1
.1
1
10
100
1000
Log FITC Fluorescence (CD8)